ٹشو بلاکس کے حجم پر حیاتیاتی مائکروسکوپی
بائیو مائیکروسکوپی آج تک، ٹشوز اور خلیات کے ایکس رے مائیکرو فیلڈز کے لیے برف کو ٹھنڈا کرنا، منجمد انتہائی پتلے حصے اور منجمد خشک ہیرا پھیری معمول کے طریقے ہیں۔ طریقہ کار کی تفصیلات درج ذیل نکات میں بیان کی گئی ہیں۔
حیاتیاتی خوردبینیں کنڈینسر لینس والی مائیکروسکوپس کو اعتدال پسند چمک حاصل کرنے کے لیے اوپر اور نیچے منتقل کیا جا سکتا ہے، یا متغیر لائٹ ایکسپینڈر کے یپرچر کو معتدل 9b چمک حاصل کرنے کے لیے تبدیل کیا جا سکتا ہے۔ اگر روشنی دھوپ والی ہے، تو اسپاٹنگ کا دائرہ مناسب طریقے سے اٹھایا جا سکتا ہے، اور متغیر روشنی کے یپرچر کو مناسب طریقے سے بڑھایا جا سکتا ہے۔ اگر روشنی بہت مضبوط ہے، تو اسپاٹ لائٹ آئینہ مناسب نیچے ہو سکتا ہے، مناسب کمی کے لیے متغیر لائٹ لیپ کا یپرچر۔ اگر اس معاملے میں اب بھی اندھا محسوس ہوتا ہے، تو آپ اسپاٹ لائٹ کے نیچے بریکٹ میں رکھے ہوئے مناسب فلٹر کا انتخاب کر سکتے ہیں۔ یہ آپ کو چمک سے مطمئن کرنے کے لیے حاصل کیا جا سکتا ہے۔ بلاشبہ، کمڈینسر لینس کے اوپری اور نچلے عہدوں کی ایڈجسٹمنٹ میں روشنی پڑھنے کے یپرچر کے سائز اور مناسب فلٹرز کے انتخاب میں فرق ہوسکتا ہے، جو کہ مشق اور تجربے کی ایک خاص مدت کے بعد ہوتا ہے۔
حیاتیاتی خوردبین ایک بہت اہم مسئلہ خلیوں کے نمونے لینے اور الگ کرنے کے عمل میں ہے، الٹرا بکلیٹس کو منجمد کرنے کے بعد منجمد خشک کرنے اور رال ایمبیڈنگ (ایف ڈی)، 65 عنصری ساخت کے مواد کے ہر حصے کو ٹھیک چلانے کے بعد منجمد خشک کرنے کا عمل ہونا ضروری ہے۔ بہت احتیاط سے ہینڈل کیا جاتا ہے، اور مشاہدہ اور تجزیہ کرنے والے خلیوں کو نقصان نہیں پہنچانا چاہیے۔ کیونکہ ایکس رے مائیکرو ایریا کا تجزیہ نہ صرف بہت سارے اقدامات کا ہوتا ہے، اور لاگت بہت زیادہ ہوتی ہے، اگر ایک طویل وقت اور متعدد مراحل کی پروسیسنگ کے بعد، تجزیہ شدہ خلیات خراب خلیات یا مردہ خلیات ہیں، غلط نتائج اخذ کرنے کے لیے۔ بہت افسوسناک ہے. مثال کے طور پر، کولیجینیز علاج سے الگ تھلگ کارڈیو مایوسائٹس کی دو شکلیں ہیں، ایک لمبی چھڑی کی شکل کی اور دوسری گول۔ مؤخر الذکر مرتے ہوئے خلیات ہیں جو سیل کی تنہائی کے دوران خراب ہو گئے تھے۔
Biomicroscopy ان دو قسم کے خلیوں میں الیکٹرولائٹس کا مواد اور تقسیم بہت مختلف ہے۔ گول کارڈیو مایوسائٹس میں Na بہت زیادہ اور K بہت کم تھا، اور مائٹوکونڈریا میں ca کا ارتکاز بہت زیادہ تھا۔ دیگر تجزیاتی طریقوں سے جانچنے کے بعد، یہ دکھایا گیا کہ گول خلیوں میں اعلی Na اور کم K اور مائٹوکونڈریا میں زیادہ ca، خلیے کی علیحدگی کے دوران خلیے کی جھلی کو پہنچنے والے نقصان کا نتیجہ تھے۔ خلیات اور بافتوں کا ٹھنڈا فکسشن اکثر بجھانے کے عمل سے ہوتا ہے جس کے بعد مائع نائٹروجن میں محفوظ کیا جاتا ہے۔ بجھانا فکسشن تحفظ کی تاثیر کے لیے اہم ہے۔ زندہ خلیات یا تازہ ٹشوز پانی سے بھرپور ہوتے ہیں، جب بجھانے میں اکثر خلیات یا ٹشوز ہوتے ہیں اور کولڈ ایجنٹ (خاص طور پر مائع نائٹروجن خالص سردی کے ساتھ) پہلے فریز فکسیشن کے حصوں سے براہ راست رابطہ کرتے ہیں، اس طرح ایک "شیل" بنتا ہے۔ سیل کے مرکز کو ٹھنڈا ہونے سے روکتا ہے۔ نتیجے کے طور پر، برف کے کرسٹل اکثر ایکس رے مائکرو سیلولر تجزیہ کے دوران بڑے خلیوں کے مرکز میں پائے جاتے ہیں۔ ایسا ہونے سے روکنے کے لیے، مائع نائٹروجن سے زیادہ لیکن 806c خشک سے کم پگھلنے والے مادے کو کولنگ ایجنٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ اس طرح کے بہت سے مادے ہیں، لیکن * حاصل کرنے میں آسان، سستا مرتکز پروپین ہے (42.120c کا ابلتا نقطہ، 187.10c کا پگھلنے کا نقطہ، 44.1 کا سالماتی وزن)، ٹھنڈک کی شرح * تیز۔ تاہم، اس میں آتش گیر ہونے کا نقصان ہے۔
حیاتیاتی خوردبین کو ایک خاص شیلف پٹھوں کے ریشے پر رکھا جا سکتا ہے، تاکہ ایک مخصوص وقت کے مرحلے تک پہنچنے کے لیے پٹھوں کے ریشے کے سنکچن کو ٹھیک کرنے کی ضرورت ہو، فوری طور پر نوزل کو شروع کریں، تاکہ مائع پروپین پٹھوں کے فائبر جیٹ تک پہنچ جائے، تاکہ اس کی بجھائی جا سکے۔ سردی طے ہے. پھر پٹھوں کے ریشے کو ریک کے ساتھ باہر نکال کر مائع نائٹروجن میں ڈالا جاتا ہے۔ خون کے خلیات یا الگ تھلگ خلیات، خلیات توجہ مرکوز کرنے کے لئے سب سے پہلے کم رفتار centrifugation فکسنگ تو، خلیات چاندی کی ٹیوب کی ایک اچھی تھرمل چالکتا میں منتقل کیا جائے گا، مائع پروپین لوت سرد میں ٹیوب فکسڈ. ہال لیبارٹری فکسڈ چوہا لبلبہ، مائع ہیلیم (یا مائع نائٹروجن) کے ساتھ سٹیل کے پہلے دو ٹکڑوں کو پری کولنگ، کلیمپ کے ساتھ تانبے کے دو ٹکڑوں کو لبلبہ کے آگے اور پیچھے رکھا جائے گا، تاکہ خالہ کی خالہ غدود بجھانے والی سردی کا تعین۔ ٹشوز یا خلیات کو بجھانے اور ٹھیک کرنے کے بعد مائع نائٹروجن میں طویل عرصے تک ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔
