کنفوکال مائکروسکوپ تکنیکی پیرامیٹرز
1 قرارداد
کنفوکل مائکروسکوپ کا سسٹم پوائنٹ اسپریڈ فنکشن ڈسٹری بیوشن آبجیکٹیو لینس اور پوائنٹ امیج انرجی ڈسٹری بیوشن کے برابر ہے۔ اسی معروضی لینس کی صورت میں، اس کی پس منظر کی ریزولیوشن (xy طیارہ) روایتی آپٹیکل خوردبین کے مقابلے میں 1.4 گنا زیادہ ہے، جو 0.4λ/NA تک پہنچتی ہے۔ مثال کے طور پر، Leica کی TcS-NT کی ریزولیوشن 0.18 μm ہے۔ کنفوکل مائیکروسکوپ کے اصول سے، ہم جانتے ہیں کہ ڈٹیکٹر پر پن ہول کی ترتیب نہ صرف پتہ لگانے والے جہاز کی تصویر میں فوکس پوائنٹ کی تصویر کی مداخلت کو مؤثر طریقے سے دباتی ہے، بلکہ عدم کھوج کی مداخلت کو بھی دباتی ہے۔ ارد فوکس ہوائی جہاز کو پتہ لگانے کے مقام کی طرف اشارہ کریں، جو تصویر کی ریزولوشن کو بہت بہتر بناتا ہے۔ مزید برآں، انتہائی ریزولوشن حاصل کرنے کے لیے، کنفوکل مائکروسکوپ سسٹمز کو کمپن پروف اسٹیج سے لیس ہونا چاہیے۔
2 حساسیت
روایتی آپٹیکل مائکروسکوپ اکثر تصاویر کو اکٹھا کرنے کے لیے سی سی ڈی کیمروں سے لیس ہوتے ہیں، لیکن سی سی ڈی کی نسبتاً کم حساسیت کی وجہ سے، کم روشنی والی روشنی جیسے فلوروسینس کا پتہ نہیں لگایا جا سکتا، اس لیے فوٹوملٹیپلائر ٹیوبیں عام طور پر کنفوکل مائیکروسکوپ سسٹم میں پتہ لگانے والے عناصر کے طور پر استعمال ہوتی ہیں۔ سی سی ڈی سے بہت زیادہ، یہ کمزور فلوروسینٹ سگنلز کے لیے بھی زیادہ حساسیت دکھا سکتا ہے۔
3 افقی قرارداد
کنفوکل مائیکروسکوپی سسٹم روایتی لائٹ مائکروسکوپی کے مقابلے میگنیفائیڈ امیجز میں زیادہ تفصیل ظاہر کرتے ہیں۔ یہاں ذکر کردہ میگنیفیکیشن سے مراد جسمانی میگنیفیکیشن نہیں ہے، بلکہ مقصدی لینس کی اسی میگنیفیکیشن حالت کے تحت کنفوکل مائکروسکوپ کے ذریعے دکھائی جانے والی تصویر کی مورفولوجیکل تفصیلات سے مراد ہے، جسے روایتی نظری خوردبین کے تحت دیکھنا مشکل ہے، اس لیے تصویر واضح اور زیادہ لطیف۔ افقی ریزولوشن زیادہ ہے۔
4 کنٹراسٹ
چونکہ آبجیکٹ الیومینیشن لائٹ اسکین میں صرف ایک بہت ہی چھوٹا فوکسڈ لائٹ اسپاٹ ہے، اور چمک اور سگنل ٹو شور کا تناسب زیادہ ہے، اس لیے سگنل لائٹ آبجیکٹ کے دوسرے پوائنٹس سے زیادہ مضبوط ہے۔ تصویری جہاز پر، پوائنٹ ڈیٹیکٹر صرف پن ہول سے گزرنے والی روشنی حاصل کر سکتا ہے، جبکہ آبجیکٹ کے دوسرے حصوں سے آوارہ روشنی کو فلٹر کیا جاتا ہے کیونکہ اسے کنفوکل پن ہول پر مرکوز نہیں کیا جا سکتا۔ اس کے نتیجے میں روایتی خوردبینوں کے مقابلے میں کنفوکل اسکیننگ مائکروسکوپ کے ساتھ حاصل کردہ نمونوں کی زیادہ برعکس تصاویر ہوتی ہیں۔
