ڈیبگنگ کے طریقے اور فیز کنٹراسٹ مائکروسکوپی کے لیے اقدامات
a Kuhler روشنی کے نظام کو ایڈجسٹ کرنے کی بنیاد پر، نمونے کو واضح طور پر توجہ مرکوز کرنے کے لئے روشن فیلڈ طریقہ استعمال کریں؛
ب اسپاٹ لائٹ کو پی ایچ 1 کی طرف موڑ دیں اور اسے ٹرن ٹیبل پر اسکیل لائن کے ساتھ سیدھ میں رکھیں۔ ایک 10 ایکس فیز کنٹراسٹ مقصد منتخب کریں اور اسے مشاہدہ کرنے والے شفاف نمونے سے بدل دیں۔
c آئی پیسز میں سے ایک کو ہٹا دیں، اسے سنٹرنگ دوربین سے تبدیل کریں، اور منظر کے میدان میں دو کنٹراسٹ رِنگز پر فوکس کریں (آبجیکٹیو لینس کی بلیک کنٹراسٹ رِنگ اور کنڈینسر لینس کی ٹرانسمیٹینس کنٹراسٹ رِنگ)؛
d نقطہ نظر کے میدان میں دو فرق کے حلقے ضروری طور پر موافق نہیں ہوسکتے ہیں۔ اسپاٹ لائٹ پر دو ایڈجسٹمنٹ ڈیوائسز کو ایڈجسٹ کریں (ایڈجسٹمنٹ راڈز اور رگڑ قسم کے نوبس کے ساتھ فرق کے بائیں اور دائیں پوزیشنوں کو آگے اور پیچھے کی پوزیشنوں کو ایڈجسٹ کرنے کے لیے)، تاکہ شفاف انگوٹھی سیاہ رنگ کے ساتھ ہم آہنگ ہونے کے لیے آگے پیچھے ہو جائے۔ ;
e ایڈجسٹمنٹ کے بعد، آبزرویشن آئی پیس پر واپس جائیں اور نمونے کے فیز فرق کی تصویر کو دیکھنے کے لیے آپٹیکل پاتھ میں سبز فلٹر کو دبائیں؛
f 20 x اور 40 x آبجیکٹیو لینز کے ساتھ مشاہدہ کرتے وقت، اسپاٹ لائٹ کو Ph2 پوزیشن پر سیٹ کیا جانا چاہئے، اور 100 x آبجیکٹیو لینس استعمال کرتے وقت، اسپاٹ لائٹ کو Ph3 پوزیشن پر سیٹ کیا جانا چاہئے۔
درخواست کا دائرہ: شفاف، غیر داغدار یا غیر داغدار نمونوں کا مشاہدہ کرنے کے لیے موزوں ہے، جیسے کہ مختلف خلیات، زندہ ٹشوز، غیر داغدار یا غیر داغدار ٹشوز، آبی حیاتیات وغیرہ۔
فیز کنٹراسٹ خوردبین کا بنیادی اصول
جب روشنی نسبتاً شفاف نمونے سے گزرتی ہے تو روشنی کی طول موج (رنگ) اور طول و عرض (چمک) میں کوئی خاص تبدیلی نہیں آتی۔ لہذا، جب غیر داغدار نمونوں (جیسے زندہ خلیات) کو باقاعدہ نظری خوردبین کے تحت مشاہدہ کیا جاتا ہے، تو ان کی شکل اور اندرونی ساخت میں فرق کرنا اکثر مشکل ہوتا ہے۔ تاہم، خلیے کے مختلف حصوں کی ریفریکٹیو انڈیکس اور موٹائی میں فرق کی وجہ سے، اس نمونے سے گزرتے وقت براہ راست اور منتشر روشنی کے نظری راستے میں فرق ہوگا۔ جیسے جیسے نظری راستہ بڑھتا یا گھٹتا ہے، روشنی کی لہروں کو تیز یا پیچھے چھوڑنے کا مرحلہ بدل جائے گا (مرحلے کے فرق کے نتیجے میں)۔ روشنی کے مرحلے کے فرق کو ننگی آنکھ سے محسوس نہیں کیا جا سکتا، لیکن فیز فرق خوردبین اپنے خاص آلے کا استعمال کر سکتی ہے - ایک سرکلر اپرچر اور ایک فیز پلیٹ، اور روشنی کے مداخلتی رجحان کو روشنی کے مرحلے کے فرق کو طول و عرض کے فرق میں تبدیل کرنے کے لیے استعمال کر سکتی ہے۔ (روشنی اور تاریک فرق) جو انسانی آنکھ سے پتہ چل سکتا ہے۔ اس سے اصل میں شفاف شے واضح روشنی اور تاریک فرق کو ظاہر کرتی ہے، اس کے برعکس کو بڑھاتی ہے، اور ہمیں خلیات کے اندر زندہ خلیات اور بعض باریک ڈھانچے کا واضح طور پر مشاہدہ کرنے کی اجازت دیتی ہے جنہیں عام نظری خوردبین اور تاریک فیلڈ خوردبین کے تحت دیکھا یا واضح طور پر نہیں دیکھا جا سکتا۔
فیز کنٹراسٹ مائکروسکوپ کا امیجنگ اصول: آپٹیکل ماخذ صرف ایک سرکلر یپرچر کی ایک شفاف انگوٹھی سے گزر سکتا ہے، جو پھر روشنی کی شہتیر میں مرکوز ہوتا ہے۔ جب روشنی کا یہ شہتیر آزمائشی شے سے گزرتا ہے، تو یہ ہر حصے کے مختلف نظری راستوں کی وجہ سے مختلف درجے کے انحراف (تفصیل) سے گزرتا ہے۔ اس حقیقت کی وجہ سے کہ شفاف انگوٹھی کے ذریعے بننے والی تصویر فیز پلیٹ پر کنجوگیٹ سطح اور معروضی عینک کے پیچھے فوکل ہوائی جہاز کے ساتھ ملتی ہے۔ لہذا، براہ راست روشنی جس نے انحراف نہیں کیا ہے وہ کنجوگیٹ سطح سے گزرتی ہے، جب کہ منحرف روشنی جو منحرف ہوئی ہے وہ معاوضہ دینے والی سطح سے گزرتی ہے۔ فیز پلیٹ پر کنجوگیٹ سطح اور معاوضے کی سطح کی مختلف خصوصیات کی وجہ سے، وہ بالترتیب ان دو حصوں سے گزرنے والی روشنی کی ایک خاص فیز فرق اور شدت میں کمی پیدا کریں گے۔ روشنی کے دو سیٹ اس کے بعد پچھلے لینس کے ذریعے آپس میں مل جائیں گے اور ایک ہی نظری راستے پر سفر کریں گے، جس سے براہ راست اور منتشر روشنی کے درمیان مداخلت ہوگی، مرحلے کے فرق کو طول و عرض کے فرق میں تبدیل کریں گے۔ اس طرح، فیز کنٹراسٹ مائیکروسکوپی کے دوران، فیز کا فرق جسے انسانی آنکھ نہیں پہچان سکتی، ایک طول و عرض کے فرق (چمک کے فرق) میں تبدیل ہو جاتی ہے جسے انسانی آنکھ بے رنگ شفاف جسم کی روشنی کے ذریعے پہچان سکتی ہے۔
