مائکروبیل آبادی کا تعین - براہ راست خوردبین گنتی کا طریقہ!
I. مقصد کے تقاضے
1، ہیمیٹوکریٹ پلیٹ کی گنتی کے اصول کو واضح کرنے کے لیے۔
2، ہیمیٹوکریٹ پلیٹ کا استعمال کرتے ہوئے مائکروبیل گنتی کے طریقہ کار میں مہارت حاصل کریں۔
II بنیادی اصول
مائیکرو اسکوپ کا براہ راست گنتی کا طریقہ ایک مخصوص سلائیڈ پر جانچنے کے لیے نمونے کی معطلی کی ایک چھوٹی سی مقدار ہے جس کا ایک متعین رقبہ اور حجم (جسے بیکٹیریولوجیکل کاؤنٹر بھی کہا جاتا ہے)، خوردبین میں براہ راست گنتی ایک سادہ، تیز، بدیہی طریقہ ہے۔ اس وقت، ملکی اور غیر ملکی عام طور پر استعمال ہونے والے بیکٹیریاولوجیکل کاؤنٹر ہیں: خون کے خلیات کی گنتی کی پلیٹ، پیٹروف-ہاؤزر بیکٹیریولوجیکل کاؤنٹر اور ہاکسلے بیکٹیریولوجیکل کاؤنٹر، وغیرہ، جو خمیر، بیکٹیریا، مولڈ اسپورز اور گنتی کے دیگر معطلی کے لیے استعمال کیے جا سکتے ہیں، بنیادی اصول۔ ایک ہی ہے. مؤخر الذکر دو قسم کے کاؤنٹرز کا کل حجم 0 ہے۔{4}} کور سلپ لگانے کے بعد 2mm3 ہے، اور کور سلپ اور کیریئر سلائس کے درمیان فاصلہ صرف 0.02mm ہے، اس لیے چھوٹے خلیے جیسے بیکٹیریا کو تیل وسرجن کے مقصد کے ساتھ دیکھا اور شمار کیا جا سکتا ہے۔ ان کاؤنٹرز کے استعمال کے علاوہ، سمیر ایریا اور فیلڈ آف ویو ایریا کے تناسب کا تخمینہ لگانے کا طریقہ بھی ہے جو براہ راست خوردبین کے نیچے مشاہدہ کیا جاتا ہے، جو عام طور پر گائے کے دودھ کی جراثیمی جانچ کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ براہ راست خوردبین گنتی کے طریقہ کار کے فوائد بدیہی، تیز رفتار اور کام کرنے میں آسان ہیں۔ تاہم، اس طریقہ کار کا نقصان یہ ہے کہ نتیجہ عام طور پر مردہ اور زندہ جانداروں کا مجموعہ ہوتا ہے۔ اس نقصان پر قابو پانے کے لیے کچھ طریقے ہیں، جیسے کہ زندہ بیکٹیریا کے داغدار مائکرو چیمبر کلچر (مختصر وقت) کا مجموعہ اور صرف زندہ جانداروں کی گنتی کے مقصد کو حاصل کرنے کے لیے سائٹوکینیسیس انحیبیٹرز کا اضافہ۔
آپریشن کے اقدامات
1، بیکٹیریل معطلی کی تیاری
مناسب ارتکاز کے ساتھ بریور کے خمیر کو بیکٹیریل سسپینشن بنانے کے لیے جراثیم سے پاک نمکین کا استعمال کریں۔
2، آئینہ گنتی چیمبر
نمونے شامل کرنے سے پہلے، گنتی کی پلیٹ کے گنتی کے چیمبر کا پہلے معائنہ کیا جانا چاہیے۔ اگر کوئی گندگی ہے، تو اسے گننے سے پہلے صاف کرنے اور خشک کرنے کی ضرورت ہے۔
3، نمونے شامل کرنا
صاف اور خشک خون کے خلیوں کی گنتی کی پلیٹ کو کور سلپ کے ساتھ ڈھانپیں، اور پھر ایک جراثیم سے پاک کیپلیری بیریٹ کا استعمال کریں تاکہ بریور کے خمیر کی معطلی کو کور سلپ کے کنارے سے ہلائیں تاکہ ایک چھوٹا قطرہ گرے، تاکہ بیکٹیریل مائع خلا کے ساتھ ساتھ کیپلیری میں داخل ہو جائے۔ خود بخود گنتی چیمبر، عام طور پر گنتی کے چیمبر کو بیکٹیریل مائع سے بھرا جا سکتا ہے۔ نمونے لیتے وقت، بیکٹیریل محلول کو پہلے اچھی طرح ہلانا چاہیے۔ نمونے شامل کرتے وقت، گنتی کے چیمبر میں ہوا کے بلبلے نہیں ہونے چاہئیں۔
4، خوردبین گنتی
نمونہ شامل کرنے کے بعد، اسے 5 منٹ تک آرام کرنے دیں، پھر خون کے خلیوں کی گنتی کی پلیٹ کو مائیکروسکوپ کیریئر اسٹیج پر رکھیں، پہلے گنتی کے چیمبر کا مقام کم میگنیفیکیشن کے ساتھ تلاش کریں، اور پھر اسے گنتی کے لیے ہائی میگنیفیکیشن میں تبدیل کریں۔ مائکروسکوپ کی روشنی کی شدت کو مناسب طریقے سے ایڈجسٹ کریں، مائکروسکوپ کے لئے ایک عکاس روشنی کے ساتھ بھی توجہ دینا چاہئے روشنی کو ایک طرف متعصب نہیں ہونا چاہئے، دوسری صورت میں نقطہ نظر کے میدان کو زبان صاف کرنے کے لئے آسان نہیں ہے گنتی چیمبر گرڈ لائن، یا صرف عمودی لائن دیکھیں یا صرف افقی لائن دیکھیں۔ اگر گنتی سے پہلے بیکٹیریل مائع بہت گاڑھا یا بہت پتلا پایا جاتا ہے، تو گنتی سے پہلے اسے دوبارہ ایڈجسٹ کرنا ضروری ہے۔ ہر خلیے میں تقریباً 5 سے 10 بیکٹیریا کے نمونے کی کمزوری کی ضروریات مناسب ہیں۔ گنتی کے لیے ہر ایک چیمبر کے لیے، 5 درمیانی کمپارٹمنٹس (4 کونوں اور درمیان میں ایک درمیانی کمپارٹمنٹ) میں موجود جانداروں کو گنتی کے لیے منتخب کیا جاتا ہے۔ گرڈ لائنوں پر واقع جانداروں کو عام طور پر صرف اوپری اور دائیں لائنوں میں شمار کیا جاتا ہے۔ خمیر بڈنگ کی صورت میں، جب ابھرتا ہوا جسم مدر سیل کے نصف سائز تک پہنچ جاتا ہے، تو اسے دو جانداروں میں شمار کیا جاتا ہے۔ نمونے کے بیکٹیریل مواد کا حساب لگانے کے لیے دو گنتی چیمبروں سے ایک نمونے کو اوسط قدر میں شمار کرنا۔
5. hematocrit پلیٹ کی صفائی
استعمال کے بعد، خون کے خلیوں کی گنتی کی پلیٹ کو نل کے نیچے پانی سے دھولیں، دھونے اور برش کرنے کے لیے سخت اشیاء کا استعمال نہ کریں، اسے خود سے خشک کریں یا دھونے کے بعد اسے خشک کرنے کے لیے ہیئر ڈرائر کا استعمال کریں۔ خوردبینی طور پر پلیٹ کا معائنہ کریں کہ آیا ہر ایک ٹوکری میں کوئی بقایا جاندار یا دیگر تیزاب موجود ہیں۔ اگر یہ صاف نہیں ہے، تو اسے صاف ہونے تک دہرایا جانا چاہیے۔
