فلوروسینس مائکروسکوپ اور عام آپٹیکل مائکروسکوپ کے درمیان فرق
فلوروسینس مائکروسکوپ اور عام آپٹیکل مائکروسکوپ فرق، فلوروسینس مائکروسکوپ اور عام آپٹیکل مائکروسکوپ مختلف ہے، یہ نمونہ کا مشاہدہ کرنے کے لئے عام روشنی کے ذریعہ کی روشنی کے ذریعے نہیں ہے، لیکن روشنی کی ایک مخصوص طول موج (عام طور پر بالائے بنفشی، نیلے بنفشی) کا استعمال. فلوروسینٹ مواد کے اندر خوردبین کے نیچے نمونے کی حوصلہ افزائی، تاکہ یہ فلوروسینٹ روشنی خارج کرے، لہذا روشنی کے منبع میں فلوروسینس مائکروسکوپ کا کردار براہ راست روشنی نہیں ہے، بلکہ اندرونی روشنی کے فلوروسینس کے نمونوں کی ایک قسم کے محرک کے طور پر ہے۔ فلوروسینس مائکروسکوپ کا ذریعہ براہ راست روشنی نہیں ہے، لیکن نمونہ کے اندر فلوروسینٹ مادہ کو متحرک کرنے کے لئے توانائی کے ذریعہ کے طور پر. ہم نمونے کا مشاہدہ کرنے کی وجہ روشنی کے منبع کی روشنی کی وجہ سے نہیں ہے، بلکہ پرجوش روشنی کی توانائی کو جذب کرنے کے بعد نمونے میں فلوروسینٹ مادے کی طرف سے پیش کردہ فلوروسینس رجحان ہے۔ یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ فلوروسینس مائیکروسکوپ کی خصوصیات بنیادی طور پر یہ ہیں کہ اس کا روشنی کا منبع ایک بڑی تعداد میں مخصوص طول موج کی حد تک جوش کی روشنی فراہم کر سکتا ہے، تاکہ جانچے گئے نمونے کے اندر موجود فلوروسینٹ مادے جوش کی روشنی کی ضروری شدت حاصل کر سکیں۔ ایک ہی وقت میں، فلوروسینس مائکروسکوپ میں متعلقہ فلٹر سسٹم ہونا ضروری ہے۔ فلوروسینس مائکروسکوپ ** فلوروسینس ہسٹو کیمسٹری کا بنیادی ٹول ہے۔ یہ انتہائی ہائی پریشر لائٹ سورس، فلٹر سسٹم (بشمول جوش اور دبانے والی فلٹر پلیٹ)، آپٹیکل سسٹم اور فوٹو گرافی کے نظام اور دیگر اہم اجزاء پر مشتمل ہے، یہ نمونہ کو فلوروسینس کے اخراج کے لیے متحرک کرنے کے لیے روشنی کی ایک مخصوص طول موج کا استعمال ہے۔
1. فلوروسینس اتیجیت کا طریقہ: روشنی کی طول موج کی حد کے مطابق UV اتیجیت طریقہ (الٹرا وایلیٹ الیومینیشن کا استعمال کرتے ہوئے) اور BV اتیجیت طریقہ (نیلی بنفشی روشنی کا استعمال کرتے ہوئے) دو قسم کے UV اتیجیت کا طریقہ الٹرا وایلیٹ لائٹ کے قریب 400nm سے چھوٹا ہے۔ جوش اس طریقہ کار میں کوئی مرئی جوش کی روشنی نہیں ہے، اس لیے مشاہدہ شدہ فلوروسینس ڈائی کی موروثی فلوروسینس کو ظاہر کرتا ہے، اور نمونے پر موجود مخصوص فلوروسینس کو بیک گراؤنڈ ٹشو کے خود فلوروسینس سے الگ کرنا آسان ہے۔
2. BV اتیجیت کا طریقہ: یہ طریقہ 404nm، 434nm بالائے بنفشی سے نیلی روشنی تک جوش کے لیے مرکوز ہے۔ یہ طریقہ نمونہ کو روشن کرنے کے لیے نیلی روشنی کا استعمال کرتا ہے، اس لیے فلوروسینس آبزرویشن سسٹم کے کٹ آف فلٹر کو ایسا فلٹر استعمال کرنا چاہیے جو نیلی روشنی کو مکمل طور پر بلاک کر سکے اور مطلوبہ سبز اور پیلے رنگ کے فلوروسینس کو مکمل طور پر منتقل کر سکے۔ فلوروسینٹ اینٹی باڈی طریقہ کے لیے فلوروسینٹ روغن۔ چونکہ اتیجیت روشنی کے زیادہ سے زیادہ جذب کی طول موج اور فلوروسینس کے زیادہ سے زیادہ اخراج کی طول موج ایک دوسرے کے قریب ہیں، اس لیے BV اتیجیت کے طریقہ کار میں استعمال ہونے والے فلٹرز کو تیز کٹ آف فلٹرز ہونا چاہیے۔ یہ طریقہ نیلی روشنی کو جوش کی روشنی کے طور پر استعمال کرتا ہے، اس لیے فلورو کروم کی جذب کرنے کی کارکردگی زیادہ ہوتی ہے اور ایک روشن تصویر حاصل کی جا سکتی ہے۔ نقصان یہ ہے کہ 500 nm سے نیچے فلوروسینس نہیں دیکھا جا سکتا، اور 500 nm سے اوپر پوری تصویر پیلی نظر آتی ہے۔ فلوروسینٹ اینٹی باڈی کے طریقہ کار میں، زیادہ تر خصوصیات کا اندازہ فلورو کروم کے منفرد رنگ سے کیا جاتا ہے، اس لیے اوپر بیان کیے گئے BV اتیجیت کے طریقہ کار کے نقصانات جب ٹھیک ٹھیک خصوصیت پر بحث کرتے ہیں تو بہت زیادہ اثر انداز ہوتے ہیں۔
