روشنی کے راستے کے اصول کے مطابق فلوروسینس خوردبین کو دو اقسام میں تقسیم کیا جا سکتا ہے:
1. ٹرانسمیشن فلوروسینس خوردبین
پرانے فلوروسینس خوردبینوں میں، جوش کی روشنی کا ذریعہ نمونہ کے مواد سے ایک کنڈینسر کے ذریعے فلوروسینس کو اکسانے کے لیے گزرتا ہے۔ فائدہ یہ ہے کہ فلوروسینس کم میگنیفیکیشن پر مضبوط ہے، لیکن نقصان یہ ہے کہ میگنیفیکیشن بڑھنے پر فلوروسینس کمزور ہو جاتا ہے۔ لہذا یہ صرف بڑے نمونے کے مواد کو دیکھنے کے لئے موزوں ہے۔
2. ایپی فلوروسینس مائکروسکوپی
جوش کی روشنی آبجیکٹیو لینس سے نیچے کی طرف نمونہ کی سطح پر گرتی ہے، یعنی اسی مقصدی لینس کو الیومینیشن کنڈینسر اور فلوروسینس کو جمع کرنے کے لیے مقصدی لینس کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔
آپٹیکل پاتھ میں ڈیکروک بیم اسپلٹر (ڈائیکروک آئینے) کو شامل کرنے کی ضرورت ہے، جو آپٹیکل ایکسس سے 45o کے زاویے پر ہے۔ جوش کی روشنی معروضی لینس میں منعکس ہوتی ہے اور نمونے پر مرکوز ہوتی ہے۔ نمونے سے پیدا ہونے والا فلوروسینس معروضی لینس اور کور کی سطح سے ظاہر ہوتا ہے۔ شیشے کی سلائیڈ کی سطح پر منعکس ہونے والی جوش کی روشنی ایک ہی وقت میں معروضی لینس میں داخل ہوتی ہے اور جوش کی روشنی اور فلوروسینس کو الگ کرنے کے لیے ڈیکروک بیم اسپلٹر میں واپس آتی ہے۔ اس کے بعد باقی جوش کی روشنی کو بلاک کرنے والے فلٹر کے ذریعے جذب کیا جاتا ہے۔ اگر آپ مختلف ایکسائٹیشن فلٹر/ڈول کلر بیم اسپلٹر/بلاکنگ فلٹر امتزاج داخل کرتے ہیں، تو آپ مختلف فلوروسینس ری ایکشن مصنوعات کی ضروریات کو پورا کر سکتے ہیں۔
اس قسم کی فلوروسینس مائکروسکوپ کا فائدہ یہ ہے کہ منظر کا میدان یکساں طور پر روشن ہوتا ہے، تصویر واضح ہوتی ہے، اور جتنی زیادہ میگنیفیکیشن ہوتی ہے، فلوروسینس اتنا ہی مضبوط ہوتا ہے۔
آپٹیکل خوردبین کی اہم اقسام کیا ہیں؟
1. عام نظری خوردبین
عام نظری خوردبین بنیادی طور پر درج ذیل حصوں پر مشتمل ہوتی ہیں: روشنی کا نظام، جس میں روشنی کا منبع اور کنڈینسر شامل ہوتا ہے۔ آپٹیکل میگنیفیکیشن سسٹم، جو مقصدی لینس اور آئی پیس پر مشتمل ہے۔ یہ خوردبین کا سب سے اہم حصہ ہے اور اسے اس لیے ڈیزائن کیا گیا ہے کہ ضرورت سے زیادہ کروی خرابی اور رنگین خرابی سے بچنے کے لیے، آئی پیس اور معروضی لینس دونوں پیچیدہ لینس گروپس پر مشتمل ہیں۔
2. لیزر کنفوکل اسکیننگ خوردبین
لیزر کنفوکل اسکیننگ مائکروسکوپ بہت اعلیٰ اور پیچیدہ لگتا ہے۔ درحقیقت، یہ لیزر کو اسکیننگ لائٹ ماخذ کے طور پر تیزی سے اسکین کرنے اور تصویری اشیاء کو پوائنٹ، لائن بہ لائن، اور سطح بہ سطح استعمال کرتا ہے۔
لیزر بیم کی چھوٹی طول موج کی بنیاد پر، بیم خود بہت پتلی ہے، جو اس بات کا تعین کرتی ہے کہ کنفوکل لیزر اسکیننگ مائیکروسکوپ کی ریزولوشن زیادہ ہے، جو کہ ایک عام آپٹیکل مائکروسکوپ سے تقریباً تین گنا زیادہ ہے۔ اس قسم کی خوردبین کا استعمال سیل مورفولوجی کا مشاہدہ کرنے اور انٹرا سیلولر بائیو کیمیکل اجزاء کا مقداری تجزیہ کرنے اور سیل مورفولوجی کی پیمائش کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔
3. ڈارک فیلڈ خوردبین
تاریک فیلڈ مائکروسکوپ کے کنڈینسر کے بیچ میں ایک ہلکی پلیٹ ہوتی ہے، جو روشنی کی روشنی کو معروضی لینس میں براہ راست داخل ہونے سے روکتی ہے۔ صرف نمونہ سے منعکس اور منتشر روشنی ہی معروضی لینس میں داخل ہو سکتی ہے۔ اس لیے، فیلڈ آف ویو کا پس منظر کالا ہے اور اشیاء کے کنارے روشن ہیں۔
