فلوروسینس مائکروسکوپی کے اصول اور ساختی خصوصیات
فلوروسینس مائیکروسکوپی نقطہ کی ایک اعلی luminescence کارکردگی کا استعمال ہے، رنگ کے نظام کے فلٹریشن کے ذریعے روشنی کی ایک خاص طول موج (جیسے الٹرا وائلٹ 3650 میں یا بنفشی نیلے 4200 میں) جوش کی روشنی کے طور پر، جوش نمونے کے اندر فلوروسینٹ مواد سے فلوروسینس کے مختلف رنگوں کا اخراج ہوتا ہے، اور پھر مشاہدے کے لیے مقصد اور آئی پیس کے ذریعے بڑھایا جاتا ہے۔ اس طرح، مضبوط کنٹراسٹ پس منظر میں، یہاں تک کہ اگر فلوروسینس بہت کمزور ہے، اس کی شناخت کرنا آسان ہے، زیادہ حساسیت، بنیادی طور پر سیل کی ساخت اور فنکشن اور کیمیائی ساخت کے مطالعہ کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ فلوروسینس مائیکروسکوپ کا بنیادی ڈھانچہ ایک عام آپٹیکل مائیکروسکوپ کے علاوہ کچھ لوازمات (جیسے فلوروسینس لائٹ سورس، ایکسائٹیشن فلٹرز، ڈوئل کلر بیم سیپریٹر اور بلاکنگ فلٹرز وغیرہ) پر مشتمل ہوتا ہے۔ فلوروسینٹ لائٹ ماخذ - عام طور پر انتہائی ہائی پریشر مرکری لیمپ (50-200W) استعمال کیا جاتا ہے، جو روشنی کی مختلف طول موجوں کا اخراج کر سکتا ہے، لیکن ہر فلوروسینٹ مواد میں سب سے مضبوط فلوروسینٹ اتیجیت طول موج ہوتی ہے، اس لیے جوش کے فلٹرز کو شامل کرنے کی ضرورت ہوتی ہے (عام طور پر بالائے بنفشی، بنفشی، نیلے اور سبز اتیجیت فلٹر)، تاکہ نمونوں کی شعاع ریزی کے ذریعے صرف ایک مخصوص طول موج کی اتیجیت روشنی ہو، جبکہ دوسری روشنی جذب ہو جائے۔ لہذا یہ ضروری ہے کہ ایک اتیجیت فلٹر (عام طور پر بالائے بنفشی، بنفشی، نیلے اور سبز اتیجیت کے فلٹر) کو شامل کیا جائے، تاکہ نمونے کے ذریعے صرف ایک مخصوص طول موج کی حوصلہ افزائی ہو، جبکہ دیگر روشنی جذب ہو جائے۔ جب ہر مادہ کو جوش کی روشنی کے ساتھ شعاع کیا جاتا ہے، تو یہ بہت ہی کم وقت میں شعاع ریزی والی روشنی کی نسبت طویل طول موج کا مرئی فلوروسینس خارج کرتا ہے۔ فلوروسینس کی مخصوصیت ہوتی ہے، عام طور پر جوش کی روشنی سے کمزور ہوتی ہے، مخصوص فلوروسینس کا مشاہدہ کرنے کے لیے، بلاکنگ (یا دبانے) کو شامل کرنے کی ضرورت کے پیچھے معروضی لینس کو استعمال کرنے کے لیے منتخب کیا جانا چاہیے۔
فلوروسینس خوردبین اور عام خوردبین کا فرق
1. روشنی کا طریقہ عام طور پر گر رہا ہے، یعنی روشنی کا منبع معروضی عینک کے ذریعے نمونے پر پیش کیا جاتا ہے۔
2. روشنی کا منبع بالائے بنفشی روشنی ہے، جس کی طول موج کم ہوتی ہے اور عام خوردبین سے زیادہ حل کرنے کی طاقت ہوتی ہے۔
3. دو خاص فلٹرز ہیں، روشنی کے منبع کے سامنے والا ایک نظر آنے والی روشنی کو فلٹر کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، اور آئی پیس اور آبجیکٹیو لینس کے درمیان والا ایک انسانی آنکھ کی حفاظت کے لیے بالائے بنفشی روشنی کو فلٹر کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔
فلوروسینس مائکروسکوپ بھی ایک قسم کی نظری خوردبین ہے، بنیادی فرق یہ ہے کہ دونوں کی اتیجیت طول موج مختلف ہیں۔ یہ فلوروسینس مائکروسکوپ اور عام آپٹیکل مائکروسکوپ کی ساخت اور مختلف طریقوں کے استعمال کا تعین کرتا ہے۔
فلوروسینس مائکروسکوپ امیونو فلوروسینس سائٹو کیمسٹری کا بنیادی ٹول ہے۔ یہ روشنی کا ذریعہ، فلٹر پلیٹ سسٹم اور آپٹیکل سسٹم اور دیگر اہم اجزاء پر مشتمل ہے۔ یہ روشنی کی ایک مخصوص طول موج کا استعمال کرتا ہے تاکہ نمونے کو فلوروسینس کے اخراج کے لیے متحرک کر سکے، جو نمونہ کی فلوروسینس امیج کو دیکھنے کے لیے معروضی لینس اور آئی پیس سسٹم کے ذریعے بڑھایا جاتا ہے۔
