آپ اپنے لیے صحیح کنفوکل خوردبین کا انتخاب کیسے کر سکتے ہیں؟ کیا کوئی خاص طریقہ ہے؟
کنفوکل مائکروسکوپی کے وائڈ فیلڈ مائکروسکوپی سے زیادہ فوائد ہیں۔ کنفوکل مائکروسکوپی نمونوں کی مسلسل آپٹیکل سیکشننگ کر سکتی ہے اور غیر فوکل طیاروں سے سگنل کی مداخلت کو خارج کر سکتی ہے۔ اس وجہ سے، confocal مائکروسکوپی کی درخواست واقعی زیادہ عام ہے. تاہم، مارکیٹ میں زیادہ سے زیادہ کنفوکل مائکروسکوپ موجود ہیں۔ کس طرح منتخب کرنے کے لئے؟
کنفوکل مائکروسکوپی کے وائڈ فیلڈ مائکروسکوپی سے زیادہ فوائد ہیں۔ کنفوکل مائکروسکوپی نمونوں کے مسلسل نظری حصے بنا سکتی ہے اور غیر فوکل طیاروں سے سگنل کی مداخلت کو خارج کر سکتی ہے۔ اس وجہ سے، confocal مائکروسکوپی واقعی زیادہ عام ہے. تاہم، مارکیٹ میں زیادہ سے زیادہ کنفوکل مائکروسکوپ موجود ہیں۔ کس طرح منتخب کرنے کے لئے؟ کنفوکل مائیکروسکوپ کا انتخاب کرتے وقت، دو بنیادی اور اہم تحفظات ہیں: نمونے کی قسم جس کا آپ مطالعہ کرنا چاہتے ہیں (مثلاً، فکسڈ یا لائیو سیل)، اور پرکھ کی قسم جسے آپ انجام دینا چاہتے ہیں (مثلاً، جامد یا متحرک سیلولر عمل)۔
فکسڈ سیلز کی کنفوکل امیجنگ
فکسڈ اور داغدار خلیوں یا ٹشوز کی تصویر بنانے کے لیے، ہم عام طور پر لیزر اسکیننگ کنفوکل (LSCM) کا انتخاب کرتے ہیں۔ اس کی بنیادی وجہ یہ ہے کہ فکسڈ مردہ خلیوں میں زندہ خلیوں میں تیز رفتار حیاتیاتی واقعات کی کمی ہوتی ہے اور وہ LSCM کے اعلی مقامی ریزولوشن سے بہتر فائدہ اٹھا سکتے ہیں۔ LSCM امیجنگ لیزر کے ذریعے نمونے کو آپٹیکل طور پر کاٹنا ہے، اور اسکیننگ کی رفتار (اسکیننگ سرنی آئینے کی رفتار پر منحصر ہے) عام طور پر 1fps ہوتی ہے۔ طویل نمائش کے اوقات کا مطلب فوٹو بلیچنگ کا زیادہ خطرہ ہے، لیکن مقررہ مردہ خلیوں کے لیے وقت اہم نہیں ہے اور ہم متعدد تصاویر لے کر اس کا اوسط نکال سکتے ہیں۔
زندہ خلیوں کی کنفوکل امیجنگ
امیجنگ لائیو سیلز کو غیر دوستانہ ماحول سے اضافی تحفظ کی ضرورت ہوتی ہے۔ امیجنگ کرتے وقت، ہمارا پہلا خیال سیل کی عملداری اور صحت کو برقرار رکھنا ہے۔ مستقل درجہ حرارت کو گرم کرنے والے عناصر اور پرفیوژن سسٹم ضروری ہیں، خاص طور پر وقت گزر جانے کے مطالعے کے لیے۔ زندہ خلیوں کی جسمانی حالت کو کنٹرول کرنے والے تیز حیاتیاتی کیمیائی واقعات وہی ہیں جن کا زیادہ تر لوگ مطالعہ کرنا چاہتے ہیں، لیکن یہ واقعات روایتی LSCM کے لیے بہت تیز ہیں۔ اس کے علاوہ، LSCM کی طویل نمائش نے بھی خلیات کو زہریلی روشنی سے نقصان پہنچایا۔ لہذا، زندہ خلیوں کی امیجنگ کے لیے خصوصی کنفوکل خوردبین کی ضرورت ہوتی ہے۔
زندہ خلیوں کی کنفوکل امیجنگ کے لیے عام طور پر دو اختیارات ہوتے ہیں: تیز اسکیننگ لیزر اسکیننگ کنفوکالز اور اسپننگ ڈسک کنفوکالز۔ تیز اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپی سست گیلوانو میٹر کے عکسوں کو تیز گونج والے اسکیننگ آئینے سے بدل دیتی ہے، جس سے اسکیننگ کی رفتار 30fps تک ہوتی ہے۔ جبکہ اسپننگ ڈسک کنفوکالز (SDCMs) کو تیز اسکیننگ کا فائدہ ہے (اگرچہ لامحالہ نقصان مقامی ریزولوشن میں ہے)، اس کی رفتار نظریاتی طور پر 2000fps تک پہنچ سکتی ہے (عملی طور پر یہ اکثر دوسرے عوامل سے محدود ہوتی ہے)۔
اگر آپ فوٹو بلیچنگ یا بہت کمزور فلوروسینس سگنل کے بارے میں فکر مند ہیں، تو SDCM زیادہ موزوں ہو سکتا ہے۔ SDCM جوش کی روشنی کو منتشر کرنے کے لیے دو گھومنے والی ڈسکس کا استعمال کرتا ہے۔ ایل ایس سی ایم کے برعکس، جو نمونے کی جگہ کو اسکین کرتا ہے، ایس ڈی سی ایم ایک وقت میں متعدد مقامات (تقریباً 100 پکسل اسپاٹس) حاصل کرتا ہے، اس لیے رفتار بہت زیادہ بڑھ جاتی ہے، اور ایس ڈی سی ایم کی فوٹو بلیچنگ اور کم فوٹو ٹوکسیٹی۔ تاہم، آپ اسکیننگ کی رفتار بڑھانے کے لیے تیز اسکیننگ کنفوکالز کا بھی استعمال کرسکتے ہیں، انتہائی حساس ڈٹیکٹرز کے ساتھ مل کر، اور فوٹو ٹوکسیٹی کو کم کرنے کے لیے جوش والی روشنی کی توانائی کو کم کرسکتے ہیں، جو روایتی کنفوکالز کے بھرپور افعال کو برقرار رکھ سکتے ہیں۔
خودکار کنفوکل امیجنگ سسٹم
کچھ محققین اپنی انفرادی ضروریات کے مطابق خوردبین میں ترمیم کرنے کے طریقے تلاش کرنا پسند کرتے ہیں۔ اور کچھ محققین اس بات میں بھی دلچسپی نہیں رکھتے کہ خوردبین دراصل کیسے کام کرتی ہیں۔ مؤخر الذکر کے لیے، ایک خودکار کنفوکل مائکروسکوپ ان کی پسند کے مطابق زیادہ ہو سکتا ہے۔ مثال کے طور پر، Olympus FluoViewFV10i ایسا مکمل طور پر خودکار ڈیسک ٹاپ 4-لیزر کنفوکل مائکروسکوپ ہے۔ اس کا کمپیکٹ انٹیگریٹڈ ڈھانچہ تقریباً کسی تنصیب کی جگہ کی ضرورت نہیں ہے۔ اس قسم کا آلہ ان محققین کے لیے مثالی ہے جنہیں ہر روز بہت زیادہ تصویری ڈیٹا حاصل کرنے کی ضرورت ہوتی ہے، لیکن یقیناً وہ روایتی کنفوکالز کی فعالیت اور لچک کو پوری طرح سے ظاہر نہیں کرتے۔ اس کے علاوہ، NikonA1 مکمل طور پر خودکار کنفوکل سسٹم بھی ہے۔ زیادہ تر روایتی کنفوکل اسکیننگ مائیکروسکوپس کی طرح، NikonA1 ایک گیلوانومیٹر اسکین ہیڈ کا استعمال کرتا ہے، جس میں ہائبرڈ اسکین ہیڈ کے ساتھ A1R سے زیادہ ریزولوشن ہوتا ہے، لیکن قدرے سست رفتار (A1R ~ 30fps)
