فلوروسینس مائکروسکوپی روایتی مائکروسکوپی سے کس طرح مختلف ہے۔
میں نے حال ہی میں چوہوں کے کچھ منجمد حصے بنانے کی کوشش کی، اور اب مجھے یہ دیکھنے کے لیے فلوروسینس مائیکروسکوپ استعمال کرنے کی ضرورت ہے کہ میں نے جو وائرس لگایا ہے وہ دماغ کے مطلوبہ حصے میں ہے یا نہیں۔ فلوروسینس مائیکروسکوپی کے کچھ بنیادی اصولوں کا مختصراً مطالعہ کرنے کی ضرورت ہے، اور میں انہیں بھی یہاں شیئر کروں گا۔
فلوروسینس مائیکروسکوپ الٹرا وائلٹ روشنی کو روشنی کے ذریعہ کے طور پر استعمال کرتا ہے تاکہ جانچ کی جا رہی چیز کو روشن کیا جا سکے، جس کی وجہ سے شے روشنی کا منبع خارج کرتی ہے، اور پھر خوردبین کے نیچے آبجیکٹ کا مشاہدہ کرتی ہے۔ بنیادی طور پر امیونو فلوروسینس خلیوں کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، یہ روشنی کے منبع، فلٹر پلیٹ سسٹم، اور آپٹیکل سسٹم پر مشتمل ہوتا ہے تاکہ آئی پیس اور معروضی لینس کی میگنیفیکیشن کے ذریعے نمونے کی فلوروسینس امیج کا مشاہدہ کیا جا سکے۔ آئیے اس فلوروسینس مائیکروسکوپ اور ریگولر آپٹیکل مائکروسکوپ کے درمیان فرق پر ایک نظر ڈالتے ہیں۔
1. روشنی کے طریقوں کے لحاظ سے
فلوروسینس مائکروسکوپ کی روشنی کا طریقہ عام طور پر گرنے والے بیم کا طریقہ استعمال کرتا ہے، جس کا مطلب ہے کہ روشنی کا ذریعہ معروضی لینس کے ذریعے ٹیسٹ کے نمونے پر پیش کیا جاتا ہے۔
2. قرارداد کے لحاظ سے
فلوروسینس مائکروسکوپی بالائے بنفشی روشنی کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتی ہے، نسبتاً کم طول موج لیکن عام نظری خوردبین سے زیادہ ریزولوشن کے ساتھ۔
3. فلٹر میں فرق
فلوروسینس مائکروسکوپ دو خاص فلٹرز استعمال کرتی ہے، ایک روشنی کے منبع کے سامنے نظر آنے والی روشنی کو فلٹر کرنے کے لیے، اور دوسرا مقصد اور آئی پیس کے درمیان الٹراوائلٹ روشنی کو فلٹر کرنے کے لیے، جو آنکھوں کی حفاظت کر سکتا ہے۔
فلوروسینس مائیکروسکوپی بھی آپٹیکل مائیکروسکوپی کی ایک قسم ہے، بنیادی طور پر اس وجہ سے کہ فلوروسینس مائیکروسکوپی کے ذریعے پرجوش طول موج مختصر ہوتی ہے، جو فلوروسینس مائیکروسکوپی اور عام مائیکروسکوپی کی ساخت اور استعمال میں فرق کا باعث بنتی ہے۔ زیادہ تر فلوروسینس خوردبینوں میں کمزور روشنی کو پکڑنے کا ایک اچھا کام ہوتا ہے، لہذا ان کی امیجنگ کی صلاحیت انتہائی کمزور فلوروسینس کے تحت بھی اچھی ہوتی ہے۔ اس کے علاوہ، حالیہ برسوں میں فلوروسینس مائکروسکوپی کی مسلسل بہتری کے ساتھ، شور بھی نمایاں طور پر کم ہوا ہے۔ لہذا، زیادہ سے زیادہ فلوروسینس خوردبینوں کو لاگو کیا جا رہا ہے.
دو فوٹون فلوروسینس مائکروسکوپی سے متعلق علم
دو فوٹوون کی حوصلہ افزائی کا بنیادی اصول یہ ہے کہ اعلی فوٹوون کی کثافت پر، فلوروسینٹ مالیکیول بیک وقت دو طویل طول موج کے فوٹون کو جذب کر سکتے ہیں، اور نام نہاد پرجوش ریاست کی زندگی کے مختصر عرصے کے بعد، ایک چھوٹا طول موج والا فوٹون خارج کر سکتے ہیں۔ اس کا اثر فلوروسینٹ مالیکیولز کو اکسانے کے لیے نصف طول موج کی طول موج کے ساتھ فوٹوون کے استعمال کے برابر ہے۔ دو فوٹوون کی حوصلہ افزائی کے لیے ایک اعلی فوٹوون کثافت کی ضرورت ہوتی ہے، اور خلیات کو نقصان پہنچانے سے بچنے کے لیے، دو فوٹون مائکروسکوپ میں ایک ہائی انرجی موڈ لاکڈ پلس لیزر کا استعمال کیا جاتا ہے۔ اس قسم کے لیزر سے خارج ہونے والے لیزر میں اعلی چوٹی کی توانائی اور کم اوسط توانائی ہوتی ہے، جس کی نبض کی چوڑائی صرف 100 فیمٹوسیکنڈ اور فریکوئنسی 80 سے 100 میگا ہرٹز تک ہوتی ہے۔ جب ایک پلسڈ لیزر کے فوٹون کو فوکس کرنے کے لیے ایک اعلی عددی یپرچر مقصد کا استعمال کرتے ہوئے، مقصد کے فوکل پوائنٹ پر فوٹوون کی کثافت سب سے زیادہ ہوتی ہے، اور دو فوٹوون کا جوش صرف مقصد کے فوکل پوائنٹ پر ہوتا ہے۔ لہذا، دو فوٹوون مائکروسکوپ کو کنفوکل پن ہولز کی ضرورت نہیں ہے، جو فلوروسینس کا پتہ لگانے کی کارکردگی کو بہتر بناتا ہے۔
عام فلوروسینس مظاہر میں، جوش کی کم فوٹوون کثافت کی وجہ سے، ایک فلوروسینٹ مالیکیول ایک ہی وقت میں صرف ایک فوٹوون کو جذب کر سکتا ہے، اور پھر تابکاری کی منتقلی کے ذریعے ایک فلوروسینٹ فوٹون خارج کر سکتا ہے، جسے سنگل فوٹوون فلوروسینس کہا جاتا ہے۔ لیزر کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتے ہوئے فلوروسینس اتیجیت کے عمل کے لیے، دو فوٹوون یا یہاں تک کہ ملٹی فوٹون فلوروسینس کا مظاہر ہو سکتا ہے۔ اس وقت، استعمال ہونے والا اتیجیت روشنی کا ذریعہ زیادہ شدت کا ہے، اور فوٹوون کی کثافت فلوروسینٹ مالیکیولز کی ضرورت کو پورا کرتی ہے تاکہ بیک وقت دو فوٹون جذب کر سکیں۔ ایک عام لیزر کو اتیجیت روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرنے کے عمل میں، فوٹوون کی کثافت اب بھی دو فوٹوون جذب کرنے کے رجحان کو پیدا کرنے کے لیے کافی نہیں ہے۔ عام طور پر، فیمٹوسیکنڈ پلس لیزر استعمال کیے جاتے ہیں، اور ان کی فوری طاقت میگا واٹ کی سطح تک پہنچ سکتی ہے۔ لہذا، دو فوٹون فلوروسینس کی طول موج اتیجیت سے کم ہے، جو نصف اتیجیت طول موج کے اتیجیت سے پیدا ہونے والے اثر کے برابر ہے۔
