فلوروسینس مائکروسکوپی لیزر کنفوکل مائکروسکوپی سے کس طرح مختلف ہے۔
فلوروسینس خوردبین
1، فلوروسینس مائکروسکوپ الٹرا وائلٹ لائٹ کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرنا ہے، جس کو جانچنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، تاکہ یہ فلوروسینس خارج کرے، اور پھر خوردبین کے نیچے آبجیکٹ کی شکل اور اس کے مقام کا مشاہدہ کرے۔ فلوروسینس مائکروسکوپ کا استعمال خلیوں میں کیمیائی مادوں کے جذب، نقل و حمل، تقسیم اور لوکلائزیشن کا مطالعہ کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ خلیے میں موجود کچھ مادے، جیسے کہ کلوروفیل، الٹرا وایلیٹ لائٹ کے ذریعے شعاع ریزی کے بعد فلوریس کر سکتے ہیں۔ کچھ مادے ایسے ہیں جو خود سے فلوروسینٹ نہیں ہوسکتے ہیں، لیکن اگر فلوروسینٹ رنگوں یا فلوروسینٹ اینٹی باڈیز سے داغے ہوئے ہیں، تو وہ بالائے بنفشی روشنی سے شعاع ریزی کے بعد بھی فلوروسیس ہوسکتے ہیں، اور فلوروسینس مائیکروسکوپی اس قسم کے مادوں کی کوالٹی اور مقداری تحقیق کا ایک ذریعہ ہے۔
2، فلوروسینس خوردبین اصول:
(A) روشنی کا منبع: روشنی کا منبع روشنی کی مختلف طول موجوں کو (الٹرا وایلیٹ سے اورکت تک) پھیلاتا ہے۔
(B) اتیجیت فلٹر ماخذ: نمونہ کے ذریعے روشنی کی ایک مخصوص طول موج کی مائدیپتی پیدا کر سکتا ہے، جبکہ فلوروسینس بیکار روشنی کے اتیجیت کو روکتا ہے۔
(C) فلوروسینٹ نمونہ: عام طور پر فلورو کروم سے داغدار ہوتا ہے۔
(D) مسدود کرنے والے فلٹرز: جوش کی روشنی کو روکیں جو نمونے کے ذریعے جذب نہیں ہوتی ہیں تاکہ فلوروسینس کو منتخب طور پر منتقل کیا جا سکے، اور فلوروسینس میں کچھ طول موجیں بھی منتخب طور پر منتقل کی جاتی ہیں۔ ایک خوردبین جو بالائے بنفشی روشنی کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتی ہے تاکہ شعاع زدہ آبجیکٹ کو فلورس بنایا جا سکے۔ الیکٹران خوردبین کو پہلی بار 1931 میں برلن، جرمنی میں نار اور ہاروسکا نے جمع کیا تھا۔ یہ خوردبین روشنی کی شہتیر کی بجائے تیز رفتار الیکٹران بیم کا استعمال کرتی ہے۔ چونکہ الیکٹران سٹریم کی طول موج روشنی کی لہر سے بہت کم ہے، اس لیے الیکٹران خوردبین کی میگنیفیکیشن 800،000 بار تک ہو سکتی ہے، کم از کم 0.2 نینو میٹر کی حد کی ریزولوشن . 1963 سکیننگ الیکٹران خوردبین استعمال کرنے کے لئے شروع کر دیا اعتراض کے چھوٹے ڈھانچے کی سطح پر دیکھا جا سکتا ہے.
3، اطلاق کا دائرہ: چھوٹی اشیاء کی تصویر کو بڑا کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ عام طور پر حیاتیات، طب، خوردبینی ذرات اور دیگر مشاہدات میں استعمال ہوتا ہے۔
کنفوکل مائکروسکوپ
1، سڑک پر منعکس ہونے والی روشنی میں کنفوکل مائکروسکوپ کے علاوہ ایک آدھے عکاس نصف لینس، دوسری سمتوں میں تہہ شدہ منعکس روشنی کے عینک سے گزرے ہوں گے، اس کی توجہ ایک پن ہول والے چکرانے پر ہے، سوراخ میں واقع ہے۔ توجہ مرکوز، چکرانے کے پیچھے ایک فوٹو ملٹی پلیئر ٹیوب ہے۔ یہ تصور کیا جا سکتا ہے کہ کنفوکل سسٹم کے اس سیٹ کے ذریعے ڈیٹیکٹر لائٹ کے فوکل پوائنٹ سے پہلے اور بعد میں منعکس ہونے والی روشنی، چھوٹے سوراخ پر توجہ مرکوز نہیں کر سکے گی، چکرا کر بلاک کر دی جائے گی۔ لہذا فوٹوومیٹر فوکل پوائنٹ پر منعکس روشنی کی شدت کی پیمائش کرتا ہے۔
2، اصول: روایتی آپٹیکل مائکروسکوپ فیلڈ لائٹ سورس کا استعمال کرتی ہے، نمونے پر ہر نقطہ کی تصویر میں پڑوسی پوائنٹس سے روشنی کے پھیلاؤ یا بکھرنے سے مداخلت کی جائے گی۔ لیزر اسکیننگ کنفوکل مائکروسکوپ ایک لیزر بیم کو روشن کرنے والے پن ہول کے ذریعے نمونہ پر روشنی کا ایک نقطہ ذریعہ بنانے کے لئے استعمال کرتا ہے نمونہ پر ہر نقطہ کی اسکیننگ کے فوکل طیارے میں، نمونہ کو شعاع کیا جاتا ہے، امیجنگ میں پن ہول کا پتہ لگانے میں ، فوٹو ملٹی پلیئر ٹیوب (PMT) یا کولڈ الیکٹروکوپلنگ ڈیوائس (cCCD) کے بعد pinhole کا پتہ لگانے کے ذریعے پوائنٹ یا پوائنٹ بائے پوائنٹ یا پوائنٹ بائے پوائنٹ، روشنی کی شدت کو فوٹو میٹر سے ماپا جاتا ہے۔ cCCD) پوائنٹ بائے پوائنٹ یا لائن بائے لائن وصول کرتا ہے اور کمپیوٹر مانیٹر اسکرین پر تیزی سے فلوروسینٹ امیج بناتا ہے۔ الیومینیشن پن ہول اور ڈٹیکشن پن ہول معروضی لینس کے فوکل ہول کے نسبت کنجوگیٹ ہے، فوکل ہوائی پر ایک ہی وقت میں الیومینیشن پن ہول اور ایمیشن پن ہول پر فوکس کرتا ہے، فوکل ہوائی جہاز کے باہر کا نقطہ پتہ لگانے والے پن ہول میں نہیں ہوگا۔ امیجنگ، تاکہ کنفوکل امیج آپٹیکل کراس سیکشن کا نمونہ ہو، جو عام خوردبین کی دھندلی تصویروں کی خامیوں پر قابو پاتا ہے۔
3،درخواست کے شعبے: طب، جانوروں اور پودوں کی تحقیق، بائیو کیمسٹری، بیکٹیریاولوجی، سیل بائیولوجی، ٹشو ایمبریالوجی، فوڈ سائنس، جینیٹکس، فارماسولوجی، فزیالوجی، آپٹکس، پیتھالوجی، باٹنی، نیورو سائنس، میرین بائیولوجی، میٹریل سائنس، الیکٹرانک سائنس، میکانکس، پیٹرولیم ارضیات، معدنیات.
