صحیح فلوروسینس مائکروسکوپ کا انتخاب کیسے کریں۔
فلوروسینس مائکروسکوپ لیبارٹریوں اور پیتھالوجی ڈیپارٹمنٹس کے لیے ایک معیاری خوردبینی امیجنگ کا سامان ہے۔ یہ مشاہدے اور امیجنگ کے لیے فلوروسینس خصوصیات کا استعمال کرتا ہے۔ یہ سیل بائیولوجی، نیورو بائیولوجی، باٹنی، مائکرو بایولوجی، پیتھالوجی، جینیات اور دیگر شعبوں میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتا ہے۔ فلوروسینس امیجنگ میں اعلی حساسیت اور اعلی خصوصیت کے فوائد ہیں، اور یہ بافتوں اور خلیوں میں مخصوص پروٹینوں اور آرگنیلز کی تقسیم کے مشاہدے، اجتماعیت اور تعامل کا مطالعہ، زندگی کے متحرک عمل جیسے آئن کے ارتکاز کی تبدیلیوں کا سراغ لگانے کے لیے بہت موزوں ہے۔ وغیرہ
مائکروسکوپ کا انتخاب
فلوروسینس خوردبین کو بنیادی طور پر تین اقسام میں تقسیم کیا گیا ہے: سیدھے فلوروسینس خوردبین (سیکشننگ کے لیے موزوں)، الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ (زندہ خلیات کے لیے موزوں، سیکشننگ کو مدنظر رکھتے ہوئے)، سٹیریوسکوپک فلوروسینس خوردبین (بڑے نمونوں کے لیے موزوں، جیسے کہ پودے، زیبرا/زیبرا۔ ایمبریو)، میڈاکا، چوہا/چوہے کے اعضاء وغیرہ)۔
فلوروسینس فلٹر کیوبز کا انتخاب
فلوروسینٹ پروبس کی اتیجیت اور اخراج طول موج پر غور کرنے کے علاوہ، فلٹر بلاکس کے انتخاب پر بھی غور کرنے کی ضرورت ہے کہ آیا ملٹی کلر لیبل والے نمونوں کے لیے غیر مخصوص جوش اور کراس کلر موجود ہے۔ تجربے میں، ہم حوصلہ افزائی کے لیے جوش کی چوٹی کے قریب ترین طول موج کا انتخاب کرنے کی کوشش کریں گے، اور وصول کرنے والی رینج میں اخراج کی چوٹی شامل ہونی چاہیے۔ مثال کے طور پر، Alexa Fluor 488 کی حوصلہ افزائی کی چوٹی 500nm ہے، اور فلوروسینس مائیکروسکوپ میں 480/40 ایکسائٹیشن فلٹر کا انتخاب کیا جا سکتا ہے۔ فلوروسینس مائیکروسکوپس میں عام طور پر استعمال ہونے والے فلوروسینس فلٹر کیوبز کو دو اقسام میں تقسیم کیا جا سکتا ہے: لانگ پاس (مختصر کے لیے ایل پی) اور بینڈ پاس (مختصر کے لیے بی پی)، جن کا انتخاب بھی ضروریات کے مطابق کرنا ہوتا ہے۔
فلوروسینٹ روشنی کے منبع کا انتخاب
فی الحال عام طور پر استعمال ہونے والے فلوروسینٹ روشنی کے ذرائع میں مرکری لیمپ، میٹل ہالائیڈ لیمپ، اور ایل ای ڈی لائٹ ذرائع شامل ہیں جو حالیہ برسوں میں تیزی سے تیار ہوئے ہیں۔ فلوروسینٹ روشنی کے منبع کا سپیکٹرم مسلسل اور منقطع ہے، اور توانائی مختلف بینڈوں میں مختلف ہوگی۔ اس کے نسبتاً تنگ سپیکٹرل بینڈ، زیادہ مستحکم توانائی کی پیداوار، طویل عمر، حفاظت اور ماحولیاتی تحفظ اور بہت سے دوسرے فوائد کی وجہ سے، ایل ای ڈی لائٹ سورس بتدریج فلوروسینس مائکروسکوپ کا مرکزی روشنی کا ذریعہ بنتا جا رہا ہے۔
confocal خوردبین
روایتی فلوروسینس مائیکروسکوپ مشاہدے میں، فلوروسینٹ مارکر مادوں اور آٹو فلوروسینس ڈھانچے کے اوور لیپنگ کی وجہ سے، وہ قریب سے مل جاتے ہیں، جبکہ روایتی ایپی فلوروسینس مائکروسکوپ آبجیکٹیو لینس نہ صرف فوکل ہوائی جہاز سے روشنی جمع کرتا ہے، بلکہ بکھری ہوئی روشنی کو اوپر اور نیچے بھی جمع کرتا ہے۔ فوکل ہوائی جہاز، جس کے نتیجے میں تصویر کی ریزولوشن اور اس کے برعکس بہت کم ہو جاتا ہے۔
کنفوکل امیجنگ اس مسئلے کو صرف فوکل ہوائی جہاز سے منعکس ہونے والی روشنی کے حصے کا پتہ لگا کر حل کرتی ہے۔ روشنی کا منبع ایک پن ہول سے گزرتا ہے تاکہ فوکل ہوائی جہاز پر ایک چھوٹی اور عمدہ روشنی کی جگہ بن سکے۔ فوکل ہوائی جہاز سے خارج ہونے والی روشنی کو مقصدی لینس کے ذریعے جمع کیا جاتا ہے۔ معروضی لینس کے فوکل پلین کے اوپر یا نیچے نقطہ سے خارج ہونے والے زیادہ تر فلوروسینس چھوٹے سوراخ میں نہیں جا سکتے۔ صرف فوکل ہول میں واقع فلوروسینس اور آف فوکس فلوروسینس کا ایک چھوٹا سا حصہ پن ہول سے گزر سکتا ہے، جبکہ فوکل ہوائی جہاز کے باہر روشنی کی شعاعیں پن ہول پلیٹ کے سامنے یا پچھلے حصے میں جمع ہوتی ہیں اور ان کے ذریعے ڈیٹیکٹر میں داخل ہونے سے روک دیا جاتا ہے۔ pinhole. پتہ چلنے والی تصویر فوکل ہوائی جہاز کی تصویر ہے، لہذا حتمی تصویر کا معیار بہت بہتر ہوا ہے۔
لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپ کے افعال کے فوائد اور قابل عمل ہونے کی وجہ سے، کنفوکل مائیکروسکوپ اعلی صحت سے متعلق سیل بائیولوجی، نباتیات اور سیل ریسرچ کے میدان میں ایک ناگزیر تجرباتی معاون ہے۔ ایک ہی وقت میں، مستقبل کے سائنسی تحقیقی مرکز میں، یہ سب سے بنیادی اور بنیادی سائنسی تحقیق کا آلہ ہوگا۔
