اپوپٹوسس کا پتہ لگانے کے لیے ٹنل کا استعمال کرتے ہوئے فلوروسینٹ مائکروسکوپی کے نتائج کیسے پڑھیں
1. نتائج کے مشاہدے میں تین نکات پر توجہ دیں، ایپی پروجیکشن کا طریقہ، ریزولوشن پروجیکشن اور فلٹر ٹریٹمنٹ۔ خاص طور پر:
روشنی کا طریقہ عام طور پر ایپسکوپک ہوتا ہے، یعنی روشنی کے منبع کو معروضی عینک کے ذریعے نمونے پر پیش کیا جاتا ہے۔
روشنی کا منبع بالائے بنفشی روشنی ہے، طول موج کم ہے، اور ریزولوشن عام خوردبینوں سے زیادہ ہے۔
دو خاص فلٹرز ہیں، روشنی کے منبع کے سامنے والا ایک نظر آنے والی روشنی کو فلٹر کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، اور آئی پیس اور معروضی لینس کے درمیان والا ایک انسانی آنکھوں کی حفاظت کے لیے بالائے بنفشی شعاعوں کو فلٹر کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔
دوسرا، ٹنل کے ذریعے اپوپٹوس کی پیمائش کرنے کے لیے استعمال ہونے والی فلوروسینٹ مائکروسکوپ بھی ایک قسم کی آپٹیکل مائکروسکوپ ہے، بنیادی فرق یہ ہے کہ دونوں کی اتیجیت طول موج مختلف ہیں۔ یہ ساخت اور استعمال کے لحاظ سے فلوروسینس مائکروسکوپ اور عام آپٹیکل مائکروسکوپ کے درمیان فرق کا تعین کرتا ہے۔ امیونو فلوروسینٹ سائٹو کیمسٹری میں فلوروسینس مائکروسکوپی ایک ضروری ٹول ہے۔ یہ اہم اجزاء پر مشتمل ہے جیسے روشنی کا ذریعہ، فلٹر پلیٹ سسٹم اور آپٹیکل سسٹم۔ یہ روشنی کی ایک مخصوص طول موج کا استعمال کرتے ہوئے نمونہ کو فلوروسینس کے اخراج کے لیے پرجوش کرنے کے لیے ہے، اور معروضی لینس اور آئی پیس سسٹم کو بڑھا کر نمونے کی فلوروسینس امیج کا مشاہدہ کرنا ہے۔
3. ٹونل میں اپوپٹوس کی پیمائش کے لیے فلوروسینس دبی ہوئی فلٹر پلیٹ دبی ہوئی فلٹر پلیٹ کا کام جوش کی روشنی کے گزرنے کو مکمل طور پر روکنا اور متعلقہ طول موج کی حد میں فلوروسینس فراہم کرنا ہے۔ اتیجیت فلٹر پلیٹ کے مطابق، مندرجہ ذیل تین قسم کی پریس فلٹر پلیٹیں عام طور پر استعمال ہوتی ہیں:
الٹرا وائلٹ لائٹ دبانے والی فلٹر پلیٹ: یہ نظر آنے والی روشنی کو گزر سکتی ہے اور الٹرا وایلیٹ لائٹ کو گزرنے سے روک سکتی ہے۔ UG-1 یا UG-5 کے ساتھ ملایا جا سکتا ہے۔ عام طور پر استعمال ہونے والا GG-3K430 یا GG-6K460۔
وایلیٹ بلیو لائٹ سپریشن فلٹر پلیٹ: 510nm سے زیادہ طول موج کے ساتھ روشنی کو منتقل کر سکتی ہے (سبز سے سرخ)، اور اسے BG-12 کے ساتھ ملایا جا سکتا ہے۔ عام طور پر OG-4K510 یا OG-1K530 استعمال کیا جاتا ہے۔
الٹرا وائلٹ لائٹ دبانے والی فلٹر پلیٹ: 460nm سے زیادہ طول موج کے ساتھ روشنی کو منتقل کر سکتی ہے (نیلے سے سرخ)، BG-3 کے ساتھ مل سکتی ہے، عام طور پر OG-11K470AK 490, K510 استعمال ہوتی ہے۔
