بہتر لیزر سکیننگ ملٹی فوٹون مائکروسکوپی کے فوائد
لیزر اسکیننگ ملٹی فوٹون مائیکروسکوپی آپٹیکل مائکروسکوپی کی ایک بڑی بہتری ہے، بنیادی طور پر زندہ خلیوں، فکسڈ سیلز اور ٹشوز کی گہری ساخت کا مشاہدہ کرنے کے لیے، اور واضح اور تیز ملٹی لیئر زیڈ پلین ڈھانچے، یعنی آپٹیکل سلائسس حاصل کر سکتے ہیں، اور تعمیر کر سکتے ہیں۔ نمونہ کی تین جہتی ٹھوس ساخت۔ کنفوکل مائیکروسکوپ ایک لیزر لائٹ سورس کا استعمال کرتا ہے، جسے مقصدی لینس کے پورے پچھلے فوکل جہاز کو بھرنے کے لیے بڑھایا جاتا ہے، اور پھر معروضی لینس کے لینس سسٹم کے ذریعے نمونے کے فوکل طیارے پر ایک بہت ہی چھوٹے پوائنٹ میں بدل جاتا ہے۔ معروضی لینس کے عددی یپرچر پر منحصر ہے، روشن ترین الیومینیشن پوائنٹ کا قطر تقریباً 0.25 ~ 0.8 μm ہے، اور گہرائی تقریباً 0.5 ~ 1.5 ہے μm کنفوکل اسپاٹ کا سائز خوردبین کے ڈیزائن، لیزر طول موج، معروضی لینس کی خصوصیات، سکیننگ یونٹ کی ریاستی ترتیب اور نمونے کی نوعیت پر منحصر ہے۔ فیلڈ خوردبینوں میں روشنی کی ایک بڑی رینج اور گہرائی ہوتی ہے، جبکہ کنفوکل خوردبینوں میں روشنی فوکل ہوائی جہاز پر ایک فوکل پوائنٹ پر مرکوز ہوتی ہے۔ کنفوکل مائیکروسکوپی کا سب سے بنیادی فائدہ یہ ہے کہ یہ تقریباً 0.5 سے 1.5 μm کی موٹائی کے ساتھ موٹے فلوروسینٹ نمونوں (50 μm یا اس سے زیادہ) کی عمدہ نظری سیکشننگ انجام دے سکتی ہے۔ مائیکروسکوپ Z-axis stepper موٹر کے ساتھ نمونہ کو اوپر اور نیچے لے کر آپٹیکل سیکشن کی تصاویر کا ایک سلسلہ حاصل کیا جا سکتا ہے۔ تصویر کی معلومات کے حصول کو ایک عین مطابق جہاز کے اندر کنٹرول کیا جاتا ہے اور نمونے پر موجود دیگر مقامات سے سگنلز کے ذریعے مداخلت نہیں کی جائے گی۔ بیک گراؤنڈ فلوروسینس کے اثر کو ہٹانے اور سگنل ٹو شور کے تناسب کو بڑھانے کے بعد، روایتی فیلڈ الیومینیشن فلوروسینس امیجز کے مقابلے میں کنفوکل امیجز کے کنٹراسٹ اور ریزولوشن میں نمایاں بہتری آئی ہے۔ بہت سے نمونوں میں، پیچیدہ نظام بنانے کے لیے بہت سے پیچیدہ ساختی اجزاء آپس میں جڑے ہوتے ہیں، لیکن ایک بار جب کافی آپٹیکل حصے اکٹھے کیے جا سکتے ہیں، تو ہم انہیں سافٹ ویئر کے ذریعے 3D میں دوبارہ تشکیل دے سکتے ہیں۔ یہ تجرباتی نقطہ نظر خلیات یا بافتوں کے درمیان پیچیدہ ساختی اور فعال تعلقات کو واضح کرنے کے لیے حیاتیاتی تحقیق میں وسیع پیمانے پر استعمال ہوتا رہا ہے۔
