لیزر سکیننگ ملٹی فوٹون مائیکروسکوپی کے فوائد میں اضافہ
لیزر اسکیننگ ملٹی فوٹون مائکروسکوپ آپٹیکل مائکروسکوپی کی ایک نمایاں بہتری ہے، جو بنیادی طور پر زندہ خلیوں، فکسڈ سیلز اور ٹشوز کے گہرے ڈھانچے کا مشاہدہ کرنے کی صلاحیت سے ظاہر ہوتی ہے، اور واضح اور تیز ملٹی لیئر زیڈ پلین ڈھانچے، یعنی آپٹیکل سلائسس، حاصل کر سکتی ہے۔ نمونوں کے تین جہتی ٹھوس ڈھانچے کی تعمیر کے لیے استعمال کیا جائے۔ کنفوکل مائیکروسکوپ ایک لیزر لائٹ سورس کا استعمال کرتا ہے، جسے مقصدی لینس کے پورے فوکل طیارے کو بھرنے کے لیے بڑھایا جاتا ہے، اور پھر معروضی لینس کے لینس سسٹم کے ذریعے نمونے کے فوکل طیارے پر بہت چھوٹے پوائنٹس میں تبدیل ہوتا ہے۔ معروضی لینس کے عددی یپرچر کے مطابق، روشن الیومینیشن پوائنٹ کا قطر تقریباً 0 ہے۔{4}}.8 μm، اور گہرائی تقریباً 0 ہے۔{7} }.5 μm کنفوکل پوائنٹ کے سائز کا تعین مائکروسکوپ ڈیزائن، لیزر طول موج، معروضی خصوصیات، اسکیننگ یونٹ کی حالت کی ترتیبات، اور نمونہ کی خصوصیات سے کیا جاتا ہے۔ فیلڈ خوردبین کی روشنی کی حد اور گہرائی بڑی ہوتی ہے، جب کہ کنفوکل مائکروسکوپ کی روشنی فوکل ہوائی جہاز پر فوکل پوائنٹ پر مرکوز ہوتی ہے۔ کنفوکل مائیکروسکوپی کا بنیادی فائدہ یہ ہے کہ یہ تقریباً 0.5 سے 1.5 μm کی موٹائی کے ساتھ، موٹے فلوروسینٹ نمونوں (50 μm یا اس سے زیادہ) پر عمدہ نظری سیکشننگ انجام دے سکتی ہے۔ مائیکروسکوپ کی Z-axis سٹیپر موٹر کا استعمال کرتے ہوئے نمونہ کو اوپر اور نیچے لے کر آپٹیکل سلائس امیجز کا سلسلہ حاصل کیا جا سکتا ہے۔ تصویر کی معلومات کا مجموعہ * * جہاز کے اندر کنٹرول کیا جاتا ہے، نمونہ پر دیگر مقامات سے خارج ہونے والے سگنلز کی مداخلت کے بغیر۔ بیک گراؤنڈ فلوروسینس کے اثر کو ہٹانے اور سگنل ٹو شور کے تناسب کو بڑھانے کے بعد، روایتی فیلڈ الیومینیشن فلوروسینس امیجز کے مقابلے میں کنفوکل امیجز کے کنٹراسٹ اور ریزولوشن میں نمایاں بہتری آئی ہے۔ بہت سے نمونوں میں، پیچیدہ ساختی اجزاء ایک دوسرے سے مل کر پیچیدہ نظام بناتے ہیں، لیکن ایک بار جب کافی آپٹیکل حصے اکٹھے کیے جا سکتے ہیں، تو ہم سافٹ ویئر کو تین جہتوں میں دوبارہ تشکیل دینے کے لیے استعمال کر سکتے ہیں۔ یہ تجرباتی طریقہ حیاتیاتی تحقیق میں خلیات یا بافتوں کے درمیان پیچیدہ ساختی اور فعال تعلقات کو واضح کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے۔
