لیزر سکیننگ ملٹی فوٹون مائکروسکوپی کے فوائد میں اضافہ
لیزر اسکیننگ ملٹی فوٹون مائکروسکوپ آپٹیکل مائیکروسکوپی میں ایک بڑی بہتری ہے، بنیادی طور پر زندہ اور فکسڈ سیلز اور ٹشوز کی گہری ساخت کا مشاہدہ کرنے کی صلاحیت میں، اور واضح اور تیز ملٹی لیئر زیڈ پلین ڈھانچے، یعنی آپٹیکل سلائسز حاصل کرنے کے لیے۔ نمونے کی تین جہتی ٹھوس ساخت کی تعمیر کی جا سکتی ہے۔ کنفوکل مائیکروسکوپی ایک لیزر لائٹ سورس کا استعمال کرتی ہے جو مقصدی لینس کے پورے پچھلے فوکل طیارے کو بھرنے کے لیے بڑھایا جاتا ہے، اور پھر معروضی لینس کے لینس سسٹم سے گزر کر نمونے کے فوکل طیارے پر بہت چھوٹے دھبوں میں تبدیل ہوتا ہے۔ معروضی لینس کے عددی یپرچر پر منحصر ہے، روشن الیومینیشن پوائنٹ قطر کا سائز تقریباً 0.25 ~ 0.8 μm ہے اور گہرائی تقریباً 0.5 ~ 1.5 ہے μm کنفوکل پوائنٹ کے سائز کا تعین مائکروسکوپ کے ڈیزائن، لیزر ویو لینتھ، معروضی لینس کی خصوصیات، سکیننگ یونٹ کی حالت اور نمونے کی نوعیت سے کیا جاتا ہے۔ فیلڈ خوردبینوں میں روشنی کی ایک بڑی حد اور روشنی کی گہرائی ہوتی ہے، جبکہ کنفوکل خوردبین روشنی کو فوکل ہوائی جہاز پر ایک ہی فوکل پوائنٹ پر مرکوز کرتی ہے۔ کنفوکل مائیکروسکوپ کا سب سے بنیادی فائدہ یہ ہے کہ موٹے فلوروسینٹ نمونوں (50 μm یا اس سے زیادہ) کے ٹھیک آپٹیکل حصے بنانے کی صلاحیت ہے، جس کی موٹائی تقریباً 0.5 سے 1.5 μm ہوتی ہے۔ مائیکروسکوپ کی Z-axis سٹیپر موٹر کے ساتھ نمونہ کو اوپر اور نیچے لے کر آپٹیکل سیکشن کی تصاویر کا ایک سلسلہ حاصل کیا جا سکتا ہے۔ تصویری معلومات کے حصول کو پہلے جہاز میں کنٹرول کیا جاتا ہے اور نمونے پر دیگر مقامات سے خارج ہونے والے سگنلز کے ذریعے اس میں مداخلت نہیں کی جاتی ہے۔ بیک گراؤنڈ فلوروسینس کے اثرات کو دور کرنے اور سگنل ٹو شور کے تناسب میں اضافہ کرنے کے بعد، کنفوکل امیج کا کنٹراسٹ اور ریزولوشن روایتی فیلڈ سے روشن شدہ فلوروسینس امیجز کے مقابلے میں نمایاں طور پر بہتر ہوا ہے۔ بہت سے نمونوں میں، بہت سے پیچیدہ ساختی اجزاء آپس میں مل کر پیچیدہ نظام بناتے ہیں، لیکن ایک بار جب کافی آپٹیکل حصے حاصل کر لیے جائیں، تو ہم سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے انہیں تین جہتوں میں دوبارہ تشکیل دے سکتے ہیں۔ یہ تجرباتی طریقہ حیاتیاتی تحقیق میں خلیات یا بافتوں کے درمیان پیچیدہ ساختی اور فعال تعلقات کو واضح کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے۔
