مائکروبیل مقدار کی پیمائش - خوردبین براہ راست گنتی کا طریقہ!
بیکٹیریا کی آبادی میں اضافے کی خصوصیت خلیوں کی تعداد میں اضافے یا سیلولر مواد میں اضافے سے ہوتی ہے۔ سیل نمبروں کی پیمائش کے کئی طریقے ہیں، جن میں ڈائریکٹ خوردبینی گنتی، پلیٹ کی گنتی، ٹربو میٹری بذریعہ سپیکٹرو فوٹومیٹر، سب سے زیادہ ممکنہ نمبر MPN، اور جھلی کی فلٹریشن شامل ہیں۔ سیلولر مادوں کی پیمائش کے طریقوں میں سیل کے خشک وزن کی پیمائش، خلیات کے بعض اجزاء جیسے نائٹروجن، آر این اے اور ڈی این اے کے مواد کی پیمائش، اور میٹابولک مصنوعات کی پیمائش شامل ہیں۔ خلاصہ طور پر، مائکروبیل ترقی کی پیمائش کرنے کے بہت سے طریقے ہیں، ہر ایک کے اپنے فوائد اور نقصانات ہیں، اور انتخاب کام میں مخصوص ضروریات پر مبنی ہونا چاہئے۔ یہ تجربہ بنیادی طور پر پیداوار اور سائنسی تحقیقی کام میں عام طور پر استعمال ہونے والے خوردبین سے براہ راست گنتی کا طریقہ متعارف کرایا گیا ہے۔
مقصد کی ضروریات
1. گنتی کے لیے خون کے خلیوں کی گنتی کا بورڈ استعمال کرنے کے اصول کو واضح کریں۔
2. مائکروبیل گنتی کے لیے خون کے خلیوں کی گنتی کے بورڈ کو استعمال کرنے کے طریقہ کار میں مہارت حاصل کریں۔
2، بنیادی اصول
مائیکروسکوپک ڈائریکٹ گنتی کا طریقہ ایک سادہ، تیز اور بدیہی طریقہ ہے جس میں کسی نمونے کے سسپنشن کی تھوڑی سی مقدار کو ایک مخصوص رقبہ اور حجم (جسے بیکٹیریل کاؤنٹر بھی کہا جاتا ہے) کے ساتھ ایک خاص شیشے کی سلائیڈ پر رکھ کر ایک خوردبین کے نیچے براہ راست شمار کیا جاتا ہے۔ فی الحال، اندرون اور بیرون ملک عام طور پر استعمال ہونے والے بیکٹیریل گننے والے آلات میں خون کے خلیات کی گنتی کی پلیٹیں، پیٹروف ہاوزر بیکٹیریل گننے والے آلات، اور ہاکسلے بیکٹیریل گنتی کے آلات شامل ہیں، یہ سبھی خمیر، بیکٹیریا، فنگل بیضوں وغیرہ کی معطلی کی گنتی کے لیے استعمال کیے جا سکتے ہیں۔ اسی بنیادی اصول کے ساتھ۔ مؤخر الذکر دو قسم کے بیکٹیریل کاؤنٹرز کا کُل حجم {{0}}.02mm3 ہوتا ہے ایک کور گلاس سے ڈھکنے کے بعد، اور کور گلاس اور کیریئر سلائیڈ کے درمیان فاصلہ صرف 0.02mm ہے۔ لہٰذا، تیل وسرجن کا مقصد چھوٹے خلیات جیسے کہ بیکٹیریا کا مشاہدہ کرنے اور گننے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ ان بیکٹیریل کاؤنٹرز کو استعمال کرنے کے علاوہ، مائیکروسکوپ کے نیچے سمیر ایریا اور فیلڈ ایریا کے تناسب کا براہ راست مشاہدہ کرنے کے لیے تخمینہ لگانے کا طریقہ بھی ہے، جو عام طور پر دودھ کے جراثیمی معائنہ کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ خوردبین کے ساتھ براہ راست گنتی کے فوائد بدیہی، تیز اور کام کرنے میں آسان ہیں۔ لیکن اس طریقہ کار کا نقصان یہ ہے کہ ناپے گئے نتائج عام طور پر مردہ اور زندہ خلیوں کا مجموعہ ہوتے ہیں۔ فی الحال، کچھ ایسے طریقے موجود ہیں جو اس خرابی کو دور کر سکتے ہیں، جیسے کہ لائیو سیل سٹیننگ چیمبر کلچر (مختصر وقت) کو یکجا کرنا اور سیل ڈویژن انحیبیٹرز کو شامل کرنا تاکہ صرف زندہ خلیوں کی گنتی کا ہدف حاصل کیا جا سکے۔
خوردبین کے نیچے براہ راست گنتی کے لیے ایک مثال کے طور پر خون کے خلیوں کی گنتی کے بورڈ کا استعمال۔ دیگر دو بیکٹیریل کاؤنٹرز کے استعمال کے طریقے مختلف مینوفیکچررز کے دستورالعمل میں مل سکتے ہیں۔ خون کے خلیوں کی گنتی کی پلیٹ کا استعمال کرتے ہوئے خوردبین کے نیچے براہ راست گنتی مائکروبیل گنتی کے لیے عام طور پر استعمال ہونے والا طریقہ ہے۔ گنتی کا بورڈ شیشے کی ایک خاص سلائیڈ ہے جس پر چار نالیوں سے تین پلیٹ فارم بنتے ہیں۔ درمیان میں وسیع پلیٹ فارم کو ایک مختصر افقی نالی کے ذریعے دو حصوں میں تقسیم کیا گیا ہے، اور پلیٹ فارم کے ہر طرف ایک گرڈ ہے۔ ہر گرڈ کو نو بڑے گرڈز میں تقسیم کیا گیا ہے، اور درمیان میں بڑا گرڈ گنتی کا کمرہ ہے۔ خون کے خلیوں کی گنتی کی پلیٹ کی ساخت کو شکل l{{0}} میں دکھایا گیا ہے۔ گنتی کے کمرے کے پیمانے کی عام طور پر دو وضاحتیں ہوتی ہیں۔ ایک یہ کہ ایک بڑے مربع کو 25 درمیانی مربعوں میں تقسیم کیا گیا ہے، اور ہر مربع کو مزید 16 چھوٹے مربعوں میں تقسیم کیا گیا ہے (شکل 15-2)؛ دوسرا طریقہ یہ ہے کہ ایک بڑے مربع کو 16 درمیانی مربعوں میں تقسیم کیا جائے اور ہر مربع کو مزید 25 چھوٹے مربعوں میں تقسیم کیا جائے۔ تاہم، گنتی کے بورڈ کے سائز سے قطع نظر، ہر بڑے مربع میں 400 چھوٹے مربع ہوتے ہیں۔ اگر ہر مربع کی طرف کی لمبائی 1 ملی میٹر ہے، تو ہر بڑے مربع کا رقبہ lmm2 ہے۔ کور گلاس سے ڈھانپنے کے بعد، کور گلاس اور سلائیڈ کے درمیان اونچائی 0.1 ملی میٹر ہے، اس لیے گنتی کے کمرے کا حجم 0.1 ملی میٹر (ایک ملی لیٹر کا ایک ہزارواں حصہ) ہے۔ پیکر 15-1 بلڈ سیل کاؤنٹنگ بورڈ کا ڈھانچہ (I) پیکر 15-2 بلڈ سیل کاؤنٹنگ بورڈ کا ڈھانچہ (II) سامنے کا منظر؛ B. عمودی حصے کا نظارہ؛ بڑھے ہوئے گرڈ کے درمیان میں گنتی کے کمرے کے طور پر ایک بڑا مربع ہے 1. خون کے خلیوں کی گنتی کا بورڈ؛ 2. کور گلاس گنتی کے کمرے میں گنتی کرتے وقت، بیکٹیریا کی کل گنتی عام طور پر پانچ مربعوں کے لیے شمار کی جاتی ہے، پھر ہر مربع کی اوسط قدر حاصل کی جاتی ہے، جس کو 25 یا 16 سے ضرب دیا جاتا ہے تاکہ ایک بڑے مربع میں بیکٹیریا کی کل تعداد حاصل کی جا سکے، جسے پھر ایک مربع میں تبدیل کیا جاتا ہے۔ lml بیکٹیریل محلول میں بیکٹیریا کی کل تعداد۔ فرض کریں کہ پانچ مربع گرڈ میں بیکٹیریل کی کل تعداد A ہے اور بیکٹیریل محلول کا کمزور عنصر B ہے۔ اگر مربع گرڈ میں 25 گنتی پلیٹیں ہیں، بیکٹیریل محلول کے 1mL میں کل بیکٹیریا کی تعداد A/5 × 25 × 104 ہے۔ × B=50000A · B. اسی طرح، اگر مربع گرڈ میں گنتی کی 16 پلیٹیں ہیں، بیکٹیریل محلول کے 1mL میں بیکٹیریا کی کل تعداد A/5 × 16 × 104 × B=32000A · بی
