الیکٹران مائکروسکوپی کے لیے حیاتیاتی نمونوں کی تیاری اور مشاہدہ
مائکروسکوپ کی ریزولوشن استعمال ہونے والی روشنی کی طول موج پر منحصر ہے۔ الیکٹران مائیکروسکوپ، جو 1933 میں ظاہر ہونا شروع ہوا، ایک الیکٹران بیم کا استعمال کرتا ہے جس کی طول موج نظر آنے والی روشنی سے بہت کم روشنی کے منبع کے طور پر ہوتی ہے، تاکہ یہ جو ریزولیوشن حاصل کر سکے وہ آپٹیکل مائکروسکوپ کے مقابلے میں بہت بہتر ہو جائے۔ روشنی کے ذرائع میں فرق بھی الیکٹران خوردبین اور نظری خوردبین کے درمیان فرق کی ایک سیریز کا تعین کرتا ہے۔
الیکٹران بیم امیجنگ کے اصولوں اور نمونوں پر عمل کرنے کے مختلف طریقوں کے فرق کے مطابق، جدید الیکٹران خوردبین نے کئی اقسام میں ترقی کی ہے۔ فی الحال، سب سے زیادہ استعمال ہونے والے ٹرانسمیشن الیکٹران خوردبین اور اسکیننگ الیکٹران خوردبین ہیں۔ سابقہ کا کل اضافہ 1000-1000000 کے درمیان ہو سکتا ہے۔ مؤخر الذکر کی کل میگنیفیکیشن 20 اور 300،000 بار کے درمیان مختلف ہو سکتی ہے۔ اس تجربے میں بنیادی طور پر دو قسم کے خوردبین کے نمونوں کی تیاری متعارف کرائی گئی ہے، ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ اور سکیننگ الیکٹران مائکروسکوپ۔
2. سامان
1. بیکٹیریا Escherichia coli (Escherichia coli) ترچھا۔
2. محلول یا ری ایجنٹ امائل ایسیٹیٹ، مرتکز سلفیورک ایسڈ، مطلق ایتھنول، جراثیم سے پاک پانی، 2% سوڈیم فاسفوٹنگ سٹیٹ (pH 6.5-8.0) آبی محلول، 0.3% پولی تھیلین formaldehyde (کلوروفارم میں گھلنشیل) محلول، خلیات Pigment c، امونیم ایسیٹیٹ، پلاسمڈ pBR322۔
3. آلات یا دیگر برتن: عام آپٹیکل مائیکروسکوپ، تانبے کی جالی، چینی مٹی کے برتن، بیکر، ڈش، جراثیم سے پاک ڈراپر، جراثیم سے پاک چمٹی، پن، سلائیڈ، کاؤنٹنگ بورڈ، ویکیوم کوٹنگ مشین، کریٹیکل پوائنٹ ڈرائر وغیرہ۔
3. آپریشن کے مراحل
(1) ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی کے لیے نمونے کی تیاری اور مشاہدہ
1. دھاتی میش کا علاج
آپٹیکل مائکروسکوپی کا نمونہ مشاہدے کے لیے شیشے کی سلائیڈ پر رکھا جاتا ہے۔ تاہم، ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی میں، چونکہ الیکٹران شیشے کی چادر میں گھس نہیں سکتے، میش مواد کو صرف کیریئر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے، جسے عام طور پر کیریئر نیٹ کہا جاتا ہے۔ کیریئر میش کو مختلف مواد اور شکلوں کی وجہ سے بہت سی مختلف خصوصیات میں تقسیم کیا جا سکتا ہے، جن میں سب سے زیادہ استعمال کیا جاتا ہے 200-400 میش (سوراخوں کی تعداد) تانبے کی جالی۔ گندگی کو دور کرنے اور اسے صاف رکھنے کے لیے استعمال سے پہلے تانبے کی جالی کا علاج کیا جانا چاہیے، ورنہ یہ سپورٹ فلم کے معیار اور نمونے کی تصاویر کی وضاحت کو متاثر کرے گا۔ اس تجربے میں تانبے کی ایک 400-جالی کا استعمال کیا جاتا ہے، جس کا علاج اس طرح کیا جا سکتا ہے: پہلے اسے امائل ایسیٹیٹ کے ساتھ کئی گھنٹوں تک بھگو کر بلیچ کریں، پھر اسے کئی بار ڈسٹل پانی سے دھوئیں، اور پھر اسے مطلق ایتھنول میں بھگو دیں۔ پانی کی کمی اگر اوپر کے طریقوں کے بعد بھی تانبے کی جالی صاف نہیں ہوتی ہے تو آپ اسے 1 سے 2 منٹ تک گندھک کے گاڑھے ہوئے گندھک کے تیزاب (1:1) میں بھگو سکتے ہیں یا اسے 1% NaOH محلول میں چند منٹ کے لیے ابال کر اسے کشید کر کے دھو سکتے ہیں۔ کئی بار پانی، اور پھر اسے ایتھنول میں اینہائیڈروس ڈیہائیڈریٹ میں ڈالیں اور ایک طرف رکھ دیں۔
2. سپورٹ جھلی کی تیاری
نمونوں کا مشاہدہ کرتے وقت، کیریئر نیٹ کو بھی غیر ساختہ، یکساں فلم کی ایک تہہ سے ڈھانپنا چاہیے، ورنہ چھوٹے نمونے کیریئر نیٹ کے سوراخوں سے نکل جائیں گے۔ اس فلم کو عام طور پر سپورٹ فلم یا کیریئر فلم کہا جاتا ہے۔ سپورٹ فلم الیکٹران شفاف ہونی چاہیے، اور اس کی موٹائی عام طور پر 20nm سے کم ہونی چاہیے۔ الیکٹران بیم کے اثرات کے تحت، فلم میں ساختی استحکام کو برقرار رکھنے اور اچھی تھرمل چالکتا رکھنے کے لیے ایک خاص میکانکی طاقت بھی ہونی چاہیے؛ اس کے علاوہ، سپورٹ نیٹ ورک الیکٹران مائیکروسکوپی میں استعمال کیا جانا چاہیے، اس کے نیچے کوئی ظاہری ڈھانچہ نہیں ہونا چاہیے، نمونہ لے جانے کے ساتھ کوئی کیمیائی رد عمل نہیں ہونا چاہیے، اور نمونے کے مشاہدے میں کوئی مداخلت نہیں ہونی چاہیے۔ اس کی موٹائی عام طور پر تقریباً 15nm ہے۔ معاون فلم پلاسٹک فلم ہو سکتی ہے (جیسے کولڈین فلم، پولی تھیلین فارملڈہائڈ فلم، وغیرہ)، کاربن فلم یا دھاتی فلم (جیسے بیریلیم فلم، وغیرہ)۔ عام کام کے حالات کے تحت، پلاسٹک فلم ضروریات کو پورا کر سکتے ہیں. پلاسٹک کی فلموں میں، کولڈین فلم تیار کرنا نسبتاً آسان ہے، لیکن اس کی طاقت پولی تھیلین فارملڈہائیڈ فلم کی طرح اچھی نہیں ہے۔
