الیکٹران مائکروسکوپی کے لیے حیاتیاتی نمونوں کی تیاری اور مشاہدہ
خوردبین کی ریزولیوشن کا انحصار روشنی کی طول موج پر ہوتا ہے، الیکٹران مائیکروسکوپ 1933 میں نظر آنا شروع ہوئی اس کی وجہ الیکٹران بیم کی نظر آنے والی روشنی کے مقابلے میں بہت کم طول موج کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرنا ہے، تاکہ اس کی ریزولوشن آپٹیکل خوردبین سے حاصل کر سکتے ہیں بہت بہتر. روشنی کا مختلف منبع الیکٹران خوردبین اور نظری خوردبین کے درمیان فرق کا ایک سلسلہ بھی متعین کرتا ہے۔
الیکٹران بیم کے امیجنگ اصول اور مختلف طریقوں پر نمونے کے کردار میں فرق کے مطابق، جدید الیکٹران مائکروسکوپ کو کئی اقسام کی تشکیل کے لیے تیار کیا گیا ہے، فی الحال * عام طور پر ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ اور اسکیننگ الیکٹران استعمال کیا جاتا ہے۔ خوردبین، سابقہ تبدیلیوں کی رینج کی کل میگنیفیکیشن سے 1،000-1،000،000 گنا کی حد میں ہو سکتا ہے، مؤخر الذکر { کی کل میگنیفیکیشن میں ہو سکتا ہے {4}}،000 کے درمیان تبدیلیوں کی کل میگنیفیکیشن گنا۔ یہ تجربہ دو قسم کے خوردبینوں کے لیے نمونوں کی تیاری پر مرکوز ہے، ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ اور اسکیننگ الیکٹران مائکروسکوپ۔
مواد
1. Escherichia coli (Escherichia coli، Escherichia coli) ترچھا تناؤ۔
2. محلول یا ری ایجنٹ ایمائل ایسیٹیٹ، مرتکز سلفیورک ایسڈ، اینہائیڈروس ایتھنول، جراثیم سے پاک پانی، 2% سوڈیم فاسفوٹونگسٹک ایسڈ (pH 6.5-8.0) آبی محلول، 0.3% پولی وینیل فارملڈہائڈ (ٹرائکلورومیتھین میں تحلیل) محلول، سائٹوکوم سی، امونیم ایسیٹیٹ، پلاسمڈ pBR322۔
3. آلات یا دیگر سامان عام آپٹیکل مائیکروسکوپ، تانبے کی جالی، چینی مٹی کے برتن، بیکر، فلیٹ ڈش، جراثیم سے پاک بریٹ، جراثیم سے پاک چمٹی، لینسیٹ، سلائیڈز، ** کاؤنٹنگ پلیٹ، ویکیوم کوٹر، کریٹیکل پوائنٹ ڈرائر وغیرہ۔
آپریشن کے اقدامات
(I) ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی کے نمونے کی تیاری اور مشاہدہ
1. دھاتی میش کا علاج
آپٹیکل مائکروسکوپی کے نمونے مشاہدے کے لیے سلائیڈوں پر رکھے گئے ہیں۔ تاہم، ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی میں، چونکہ الیکٹران شیشے کی چادر میں گھس نہیں سکتے، صرف میش مواد کو کیریئر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے، جسے عام طور پر کیریئر میش کہا جاتا ہے۔ کیریئر میش کو مختلف مواد اور شکلوں کی وجہ سے بہت سی مختلف خصوصیات میں تقسیم کیا جا سکتا ہے، جن میں سے * عام طور پر استعمال ہونے والا 200-400 میش (سوراخوں کی تعداد) تانبے کی جالی ہے۔ تانبے کی جالی کو استعمال کرنے سے پہلے اس پر موجود گندگی کو دور کرنے اور اسے صاف رکھنے کے لیے اس کا علاج کیا جانا چاہیے، ورنہ یہ معاون فلم کے معیار اور نمونے کی تصاویر کی وضاحت کو متاثر کرے گا۔ اس تجربے میں استعمال ہونے والی تانبے کی جالی 400 میش ہے، جس کا علاج مندرجہ ذیل طریقے سے کیا جا سکتا ہے: سب سے پہلے اسے امائل ایسیٹیٹ سے چند گھنٹوں کے لیے بلیچ کریں، پھر اسے کئی بار ڈسٹل پانی سے دھوئیں، اور پھر اسے اینہائیڈروس ایتھنول میں بلیچ کریں۔ پانی کی کمی اگر مندرجہ بالا طریقہ سے تانبے کی جالی اب بھی صاف نہیں ہے، تو اسے 1 ~ 2 منٹ میں ڈبو کر مرتکز گندھک کے تیزاب (1:1) کو پتلا کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، یا 1% NaOH محلول میں کئی منٹوں کے لیے ابال کر، آست پانی سے کئی بار دھویا جا سکتا ہے۔ , anhydrous ایتھنول پانی کی کمی میں رکھا، استعمال کیا جائے.
2. سپورٹ فلم کی تیاری
نمونے کے مشاہدے میں، کیریئر نیٹ ورک میں بھی غیر ساختہ، یکساں فلم کی ایک تہہ سے ڈھانپنا چاہیے، ورنہ چھوٹے نمونے کیریئر نیٹ ورک کے سوراخوں سے نکل جائیں گے، فلم کی اس تہہ کو عام طور پر سپورٹ فلم یا کیریئر فلم کہا جاتا ہے۔ سپورٹ فلم الیکٹران کے لیے شفاف ہونی چاہیے، اور اس کی موٹائی عام طور پر 20nm سے کم ہونی چاہیے۔ الیکٹران بیم کے اثرات کے تحت، فلم میں میکانی طاقت کی ایک خاص ڈگری بھی ہونی چاہئے، ساخت کے استحکام کو برقرار رکھ سکتا ہے، اور اچھی تھرمل چالکتا ہے؛ اس کے علاوہ، سپورٹ نیٹ ورک کا الیکٹران مائکروسکوپ کے نیچے کوئی نظر آنے والا ڈھانچہ نہیں ہونا چاہیے، اور اس کا نمونہ لے جانے کے ساتھ کیمیائی رد عمل نہیں ہونا چاہیے، اور نمونے کے مشاہدے میں مداخلت نہیں کرتا، اور اس کی موٹائی عام طور پر تقریباً 15nm ہوتی ہے۔ سپورٹ فلم پلاسٹک کی فلم (مثلاً فائر کاٹن فلم، پولی تھیلین فارملڈہائیڈ فلم، وغیرہ)، کاربن فلم یا دھاتی فلم (مثلاً بیریلیم فلم، وغیرہ) سے بن سکتی ہے۔ معمول کے کام کے حالات کے تحت، ضروریات کو پلاسٹک کی فلم سے پورا کیا جا سکتا ہے، جبکہ فائر کپاس کی چپکنے والی فلم میں پلاسٹک فلم کی تیاری نسبتاً آسان ہے، لیکن طاقت پولی تھیلین فارملڈہائیڈ فلم کی طرح مضبوط نہیں ہے۔
