تیل کے وسرجن مائکروسکوپی میں کل بڑھنے اور قرارداد کے مابین تعلقات
مائکروبیولوجیکل ریسرچ میں استعمال ہونے والے مائکروسکوپوں کے مقاصد عام طور پر تین اقسام ہوتے ہیں: کم میگنیفیکیشن (1 {{2 {0}} x) ، اعلی میگنیفیکیشن (4 0 x) ، اور تیل میں اضافہ (100x)۔ یہاں لفظ 'OI' (تیل وسرجن) بھی ہے جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ اس میں ان تینوں میں سب سے زیادہ اضافہ ہوتا ہے۔ استعمال شدہ آئپیس کی بڑھنے پر انحصار کرتے ہوئے ، جس چیز کا معائنہ کیا جارہا ہے اسے 1000-1600 اوقات میں بڑھایا جاسکتا ہے۔ جب استعمال میں ہوں تو ، تیل کے وسرجن لینس اور دیگر مقاصد کے مابین فرق یہ ہے کہ شیشے کی سلائیڈ اور معروضی لینس کے درمیان ہوا کی ایک پرت نہیں ہے ، بلکہ تیل کی ایک پرت کو تیل کے وسرجن کا نظام کہا جاتا ہے۔ اس قسم کا تیل اکثر سیڈر ووڈ آئل کے طور پر منتخب کیا جاتا ہے کیونکہ اس کا اضطراب انگیز انڈیکس N =1 52 ، جو شیشے کی طرح ہے۔ جب روشنی کسی شیشے کی سلائیڈ سے گزرتی ہے تو ، یہ براہ راست دیودار کے تیل کے ذریعے بغیر کسی اضطراب کے معروضی لینس میں داخل ہوسکتا ہے۔ اگر شیشے کی سلائیڈ اور معروضی لینس کے درمیان درمیانے درجے کی ہوا ہے تو ، اسے خشک نظام کہا جاتا ہے۔ جب روشنی شیشے کی سلائیڈ سے گزرتی ہے تو ، یہ پھٹا ہوا اور بکھر جاتا ہے ، اور معروضی عینک میں داخل ہونے والی روشنی کی مقدار واضح طور پر کم ہوجاتی ہے ، جو نظارے کے میدان کی روشنی کو کم کرتی ہے۔ تیل کے آئینے کے استعمال سے نہ صرف روشنی میں اضافہ ہوتا ہے ، بلکہ بنیادی طور پر عددی یپرچر میں بھی اضافہ ہوتا ہے ، کیونکہ مائکروسکوپ کی میگنیفیکیشن کی کارکردگی اس کے عددی یپرچر کے ذریعہ طے کی جاتی ہے۔ نام نہاد عددی یپرچر سے مراد زیادہ سے زیادہ زاویہ کے آدھے سائن کی پیداوار ہے جس پر روشنی کا اندازہ لگایا جاتا ہے کہ شیشے کی سلائیڈ اور معروضی لینس کے درمیان میڈیم کے اضطراب انگیز اشاریہ کے ذریعہ معروضی لینس (جسے لینس زاویہ کے نام سے جانا جاتا ہے) پر ضرب لگائی جاتی ہے۔ اس کا اظہار مندرجہ ذیل فارمولے سے کیا جاسکتا ہے: نا=n × sin а ، جہاں نا=عددی یپرچر ؛ N=میڈیم کا اضطراب انگیز اشاریہ ؛ زیادہ سے زیادہ واقعہ زاویہ کا ایک=نصف ، یعنی آئینے کے زاویہ کا نصف۔ لہذا ، جتنا زیادہ زاویہ جس میں روشنی کا مقصد معروضی عینک پر لگایا جاتا ہے ، مائکروسکوپ کی کارکردگی اتنی ہی زیادہ ہوتی ہے ، اور اس زاویہ کا سائز معروضی عینک کے قطر اور فوکل لمبائی پر منحصر ہوتا ہے۔ دریں اثنا ، A کی نظریاتی حد 90 .. sin90 ہے۔ ＝ لہذا ، جب ہوا کو درمیانے درجے کے طور پر استعمال کرتے ہیں (n =1) ، عددی یپرچر 1 سے زیادہ نہیں ہوسکتا۔ اگر اسفالٹ کو میڈیم کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے ، جیسے جیسے N میں اضافہ ہوتا ہے ، تو عددی یپرچر بھی بڑھ جاتا ہے۔ اگر روشنی کا واقعہ زاویہ 120o ہے اور اس کا نصف حصہ sin60o =0 87 ہے ، پھر: جب ہوا کو میڈیم کے طور پر استعمال کیا جائے تو: na =1 × 0. 87=0. 87 ؛ جب پانی کو میڈیم کے طور پر استعمال کیا جائے تو: نا =1. 33 × 0. 87=1. 15 ؛ جب اسفالٹ کو میڈیم کے طور پر استعمال کرتے ہو: نا =1. 52 × 0. 87=1. 32. ایک مائکروسکوپ کی قرارداد سے مراد دو پوائنٹس کے مابین کم سے کم فاصلے کو ممتاز کرنے کی صلاحیت ہے۔ یہ معروضی لینس کے عددی یپرچر کے لئے براہ راست متناسب ہے اور طول موج کی لمبائی کے متضاد متناسب ہے۔ لہذا ، معروضی لینس کا عددی یپرچر جتنا بڑا ہوگا ، روشنی کی لہر کی طول موج ، مائکروسکوپ کی قرارداد اتنی ہی زیادہ ہوگی ، اور جس چیز کا معائنہ کیا جارہا ہے اس کی عمدہ ڈھانچے کی تمیز کی جاسکتی ہے۔
لہذا ، معروضی لینس کا عددی یپرچر جتنا بڑا ہوگا ، روشنی کی لہر کی طول موج ، مائکروسکوپ کی قرارداد اتنی ہی زیادہ ہوگی ، اور جس چیز کا معائنہ کیا جارہا ہے اس کی عمدہ ڈھانچے کی تمیز کی جاسکتی ہے۔ لہذا ، ایک اعلی ریزولوشن کا مطلب ہے ایک چھوٹا سا امتیازی فاصلہ ، اور یہ دو عوامل متضاد متناسب ہیں۔ کچھ لوگ عام طور پر قرارداد کی وضاحت کرتے ہیں کہ یہ کتنے مائکرو میٹر یا نینو میٹر ہیں ، جو حقیقت میں کم سے کم ریزولوشن فاصلے کے ساتھ قرارداد کو الجھاتے ہیں۔ ایک مائکروسکوپ کی قرارداد کی نمائندگی کم سے کم فاصلے سے کی جاتی ہے جس کو حل کیا جاسکتا ہے۔ کم سے کم فاصلہ جو دو نکات کے درمیان فرق کرسکتا ہے λ/2na ہے ، جہاں روشنی کی لہر کی λ=طول موج ہے۔ روشنی کی لہر کی اوسط لمبائی جو ننگی آنکھ کے ذریعہ سمجھی جاسکتی ہے 0. 55 μ m ہے۔ اگر عددی یپرچر ایک اعلی طاقت کے مقصد لینس کے لئے 0. 65 ہے تو ، یہ دو پوائنٹس کے درمیان فاصلے کو 0. 42 μ m کے طور پر ممتاز کرسکتا ہے۔ تاہم ، نیچے دو پوائنٹس کے درمیان فاصلہ 0. 42 μ m کو تمیز نہیں کیا جاسکتا ، یہاں تک کہ اگر مائکروسکوپ کی مجموعی اضافہ کو بڑھانے کے لئے ایک بڑی میگنیفیکیشن آئپیس استعمال کیا جاتا ہے۔ صرف ایک بڑے عددی یپرچر کے ساتھ ایک بڑے معروضی لینس کا استعمال کرکے ہی اس کی قرارداد میں اضافہ کیا جاسکتا ہے۔ مثال کے طور پر ، جب 1.25 کے عددی یپرچر کے ساتھ تیل کے آئینے کا استعمال کرتے وقت ، دو نکات کے درمیان کم سے کم فاصلہ جس میں تمیز کی جاسکتی ہے وہ 0. 55/(2 × 1.25) =0. 22 μ m ہے۔ لہذا ، ہم دیکھ سکتے ہیں کہ اگر ایک اعلی طاقت کا مقصد لینس 4 0 اوقات (Na =0}. 65) کی میگنیفیکیشن کے ساتھ ہے اور 24 بار کی اضافہ کے ساتھ ایک آنکھ استعمال کیا جاتا ہے ، حالانکہ کل اضافہ 96 {33}} اوقات ہے ، کم سے کم ریزولوشن کا فاصلہ صرف 0.42 μ m ہے۔ اگر تیل کا آئینہ 90 بار (نا =1. 25) اور 9 بار کی بڑھنے کے ساتھ ایک آئپیس استعمال کیا جاتا ہے ، حالانکہ کل اضافہ 810 گنا ہے ، تو 0.22 μ میٹر کا فاصلہ ممتاز کیا جاسکتا ہے۔
