فلوروسینس مائکروسکوپ کے لیے نمونوں کی تیاری کے لیے تقاضے
(1) شیشے کی سلائیڈ
سلائیڈ کی موٹائی 0.8 اور 1.2 ملی میٹر کے درمیان ہونی چاہیے۔ اگر سلائیڈ بہت موٹی ہے، تو ایک طرف، یہ زیادہ روشنی جذب کرے گی، اور دوسری طرف، یہ جوش کی روشنی کو نمونے پر جمع نہیں ہونے دے گی۔ شیشے کی سلائیڈ ہموار، موٹائی میں یکساں ہونی چاہیے، اور اس میں کوئی واضح fluorescence نہیں ہونا چاہیے۔ کبھی کبھی کوارٹج شیشے کی سلائیڈوں کی ضرورت ہوتی ہے۔
(2) شیشے کی سلائیڈ کا احاطہ کریں۔
کور گلاس کی موٹائی تقریباً 0.17 ملی میٹر ہے اور یہ ہموار ہے۔ حوصلہ افزائی کی روشنی کو بڑھانے کے لئے، مداخلت کا احاطہ گلاس بھی استعمال کیا جا سکتا ہے. یہ ایک خاص طور پر ڈیزائن کیا گیا کور گلاس ہے جس میں مادوں کی کئی تہوں (جیسے میگنیشیم فلورائیڈ) ہیں جو مختلف طول موج کی روشنی پر مختلف مداخلت کے اثرات رکھتے ہیں۔ یہ فلوروسینس کو آسانی سے گزرنے کی اجازت دے سکتا ہے، جبکہ عکاسی پرجوش روشنی نمونے کو پرجوش کر سکتی ہے۔
(3) نمونہ
ٹشو کے ٹکڑے یا دیگر نمونے زیادہ موٹے نہیں ہونے چاہئیں۔ اگر وہ بہت موٹی ہیں تو، زیادہ تر جوش کی روشنی نمونے کے نچلے حصے میں استعمال ہوتی ہے، جبکہ اوپری حصہ جس کا براہ راست معروضی لینس سے مشاہدہ کیا جاتا ہے پوری طرح پرجوش نہیں ہوتا ہے۔ اس کے علاوہ، سیل اوورلیپ یا ناپاک ماسکنگ فیصلے کو متاثر کر سکتا ہے۔
(4) سگ ماہی ایجنٹ
گلیسرین کو عام طور پر بڑھتے ہوئے ایجنٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، جس میں بے ساختہ فلوروسینس، بے رنگ اور شفاف ہونا ضروری ہے۔ فلوروسینس چمک pH 8 پر نسبتاً روشن ہے۔{1}}.5 اور جلدی ختم ہونا آسان نہیں ہے۔ لہذا، گلیسرول اور 0.5mol/lpH90-9.5 کاربونیٹ بفر کا مساوی مرکب عام طور پر بڑھتے ہوئے ایجنٹ کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔
(5) آئینے کا تیل
نمونوں کا مشاہدہ کرنے کے لیے ڈارک فیلڈ فلوروسینس مائکروسکوپ اور آئل مائکروسکوپ کا استعمال کرتے وقت، لینس آئل کا استعمال کرنا ضروری ہے۔ خاص طور پر بنا ہوا نان فلوروسینٹ لینس آئل استعمال کرنا بہتر ہے، جسے اوپر بیان کیے گئے گلیسرول سے بھی بدلا جا سکتا ہے۔ مائع پیرافین بھی استعمال کیا جا سکتا ہے، لیکن ریفریکٹیو انڈیکس کم ہے اور تصویر کے معیار پر تھوڑا سا اثر پڑتا ہے۔
