سٹیریو فلوروسینس مائکروسکوپ کا استعمال اور احتیاطی تدابیر
ہدایات:
(1) سٹیج پر مواد کی چادر رکھیں۔
(2) فلوروسینٹ مائکروسکوپ کے وولٹیج سٹیبلائزر کو آن کریں۔ پھر یووی لیمپ کو جلانے کے لیے اسٹارٹ گروپ کو دبائیں اور اسے 15 منٹ کے اندر بند نہ کریں، اور اسے آف کرنے کے بعد 3 منٹ کے اندر دوبارہ شروع نہ کریں۔
(3) ایکسائٹیشن فلٹر کو v میں، رنگ الگ کرنے والے فلٹر کو v میں، اور 495 یا 475nm بلاک کرنے والا فلٹر منتخب کریں۔
(4) خوردبینی جانچ کے لیے uvFL40, uvFL100 فلوروسینٹ آبجیکٹو خوردبین کا انتخاب کریں۔
(5) سلائیڈ پر نان فلوروسینٹ آئل شامل کریں، پہلے 40 ایکس استعمال کریں، اور پھر چیک کرنے کے لیے 100 ایکس فوکسنگ مائکروسکوپ استعمال کریں۔ فلوروسینس ظاہر ہوتا ہے۔
(7) چونکہ فلوروسینٹ مادوں کی مائدیپتی وقت کے ساتھ ساتھ الٹراوائلٹ روشنی سے شعاع کرنے پر آہستہ آہستہ کمزور ہوتی جاتی ہے، لہٰذا خوردبینی جانچ کے دوران منظر کے میدان کو کثرت سے تبدیل کیا جانا چاہیے۔
(8) uvFL10 یا uvFL20 کم میگنیفیکیشن خوردبین کو بھی مواد کا معائنہ کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے (کم طاقت والے لینز استعمال کرتے وقت فلوروسینٹ تیل نہیں ڈالا جاتا ہے)۔
فلوروسینس امیج کی ریکارڈنگ کا طریقہ:
فلوروسینس مائکروسکوپ کے ذریعہ دیکھی جانے والی فلوروسینس امیج میں مورفولوجیکل خصوصیات اور فلوروسینس رنگ اور چمک دونوں ہیں۔ نتائج کا فیصلہ کرتے وقت، جامع فیصلے کے لیے دونوں کو یکجا کیا جانا چاہیے۔ نتائج سبجیکٹیو انڈیکیٹرز کی بنیاد پر ریکارڈ کیے جاتے ہیں، یعنی کارکنوں کے بصری مشاہدے کی بنیاد پر۔ ایک عام گتاتمک مشاہدے کے طور پر، بنیادی طور پر قابل اعتماد۔ ٹیکنالوجی اور سائنس کی ترقی کے ساتھ، معروضی اشارے فیصلے کے نتائج کو مختلف ڈگریوں تک ریکارڈ کرنے کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں، جیسے سیل سپیکٹرو فوٹو میٹر، تصویری تجزیہ کار اور دیگر آلات۔ تاہم، ان آلات کے ذریعے ریکارڈ کیے گئے نتائج کو موضوعی فیصلوں کے ساتھ بھی ملایا جانا چاہیے۔
فلوروسینس امیجز کو ریکارڈ کرنے کے لیے فلوروسینس مائکروسکوپ فوٹو گرافی بہت ضروری ہے۔ چونکہ فلوروسینس کو دھندلا اور کمزور کرنا آسان ہے، اس لیے نتائج کو حقیقی وقت میں ریکارڈ کرنا ضروری ہے۔ طریقہ بنیادی طور پر عام فوٹومیکروگرافی جیسا ہی ہے۔ بس تیز رفتار فوٹو حساس فلم استعمال کرنے کی ضرورت ہے جیسے ASA200 یا اس سے اوپر یا 24. اوپر۔ چونکہ بالائے بنفشی روشنی کا فلوروسینس بجھانے پر گہرا اثر پڑتا ہے، جیسے کہ FITC مارکر، جب 30s کے لیے الٹراوائلٹ روشنی سے شعاع کیا جاتا ہے تو فلوروسینس کی چمک 50 فیصد کم ہو جاتی ہے۔ لہذا، اگر نمائش کی رفتار بہت سست ہے، تو فلوروسینٹ تصویر نہیں لی جاسکتی ہے۔ جنرل ریسرچ فلوروسینس خوردبینوں میں نیم خودکار یا مکمل طور پر خودکار فوٹومیکروگرافی سسٹم کے آلات ہوتے ہیں۔
احتیاطی تدابیر:
(1) فلوروسینس مائکروسکوپ فیکٹری ہدایات کی ضروریات کے مطابق سختی سے کام کریں، اور پروگرام کو اپنی مرضی سے تبدیل نہ کریں۔
(2) اندھیرے والے کمرے میں معائنہ کیا جانا چاہیے۔ ڈارک روم میں داخل ہونے کے بعد، پاور سپلائی کو جوڑیں اور الٹرا ہائی پریشر مرکری لیمپ کو 5-15 منٹ کے لیے روشن کریں۔ روشنی کے منبع سے مضبوط روشنی کے مستحکم ہونے کے بعد، آنکھیں مکمل طور پر تاریک کمرے میں ڈھال لی جاتی ہیں، اور پھر نمونے کا مشاہدہ کرنا شروع کر دیتی ہیں۔
(3) بالائے بنفشی شعاعوں کو آنکھوں کو نقصان پہنچانے سے روکنے کے لیے، روشنی کے منبع کو ایڈجسٹ کرتے وقت حفاظتی شیشے پہننا چاہیے۔
(4) معائنہ کا وقت ترجیحی طور پر ہر بار 1-2 گھنٹے ہے۔ اگر یہ 90 منٹ سے زیادہ ہو جائے تو الٹرا ہائی پریشر مرکری لیمپ کی روشنی کی شدت بتدریج کم ہو جائے گی اور فلوروسینس کمزور ہو جائے گی۔ نمونہ کو الٹرا وائلٹ شعاعوں سے 3-5 منٹ تک شعاعوں کے بعد، فلوروسینس بھی نمایاں طور پر کمزور ہو جائے گا۔ لہذا، یہ زیادہ سے زیادہ 2-2 گھنٹے سے زیادہ نہیں ہونا چاہیے۔ 3h.
(5) فلوروسینس مائکروسکوپ کے روشنی کے منبع کی زندگی محدود ہے، اور وقت بچانے اور روشنی کے منبع کی حفاظت کے لیے نمونوں کا اجتماعی معائنہ کیا جانا چاہیے۔ جب موسم گرم ہو، تو گرمی کو ختم کرنے کے لیے پنکھے شامل کیے جائیں، اور نئے بلب کو ان کے استعمال کے وقت کے آغاز سے ہی ریکارڈ کیا جانا چاہیے۔ جب آپ چراغ بجھ جانے کے بعد اسے دوبارہ استعمال کرنا چاہتے ہیں، تو آپ کو اس وقت تک انتظار کرنا چاہیے جب تک کہ بلب روشن ہونے سے پہلے کافی ٹھنڈا نہ ہو جائے۔ دن میں کئی بار روشنی کے منبع کو روشن کرنے سے گریز کریں۔
(6) داغ لگنے کے فوراً بعد نمونے کا مشاہدہ کریں، کیونکہ وقت کے ساتھ ساتھ فلوروسینس آہستہ آہستہ کمزور ہوتا جائے گا۔ اگر نمونہ کو پولی تھیلین پلاسٹک بیگ میں 4 ڈگری پر ذخیرہ کیا جائے تو فلوروسینس کے کمزور ہونے میں تاخیر ہو سکتی ہے اور بڑھتے ہوئے ایجنٹ کو بخارات بننے سے روکا جا سکتا ہے۔
(7) فلوروسینس چمک کے فیصلے کا معیار: اسے عام طور پر چار سطحوں میں تقسیم کیا جاتا ہے، یعنی "ایک" - کوئی یا کمزور فلوروسینس نہیں دیکھا جا سکتا ہے۔ "پلس"—صرف واضح طور پر دکھائی دینے والی فلوروسینس کو دیکھا جا سکتا ہے۔ "پلس پلس" — مرئی اور روشن
