لیزر کنفوکل مائکروسکوپ اور روایتی آپٹیکل مائکروسکوپ کے درمیان فرق
لیزر اسکیننگ کنفوکل فلوروسینس مائیکروسکوپی ایک نسبتاً ترقی یافتہ مالیکیولر اور سیل بائیولوجی کا تجزیہ کرنے والا آلہ ہے جو حیاتیاتی نمونوں کا سہ جہتی ڈیٹا حاصل کرنے کے لیے کمپیوٹر، لیزر اور امیج پروسیسنگ ٹیکنالوجی کا استعمال کرتا ہے۔ یہ بنیادی طور پر زندہ خلیوں کی ساخت اور مخصوص مالیکیولز اور آئنوں کی حیاتیاتی تبدیلیوں، مقداری تجزیہ، اور حقیقی وقت کے مقداری تعین کے لیے استعمال ہوتا ہے۔
لیزر کنفوکل مائیکروسکوپی کا اصول: روشنی کے منبع کے پیچھے رکھے ہوئے الیومینیشن پن ہول اور ڈٹیکٹر کے سامنے رکھے ہوئے ڈٹیکشن پن ہول کو پوائنٹ الیومینیشن اور پوائنٹ کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کریں۔ الیومینیشن پن ہول کے ذریعے روشنی کے منبع سے خارج ہونے والی روشنی نمونے کے فوکل طیارے پر ایک نقطہ پر مرکوز ہوتی ہے، اور اس نقطہ سے خارج ہونے والی فلوروسینس کو پتہ لگانے والے پن ہول پر امیج کیا جاتا ہے، اور اس نقطہ سے باہر کسی بھی خارج ہونے والی روشنی کو پتہ لگانے سے روک دیا جاتا ہے۔ pinhole الیومینیشن پن ہول اور ڈٹیکشن پن ہول شعاع ریزی والے نقطہ یا کھوجنے والے نقطہ سے جڑے ہوئے ہیں، لہذا پتہ لگایا گیا نقطہ کنفوکل پوائنٹ ہے، اور وہ ہوائی جہاز جہاں پتہ چلا پوائنٹ واقع ہے وہ کنفوکل ہوائی جہاز ہے۔
کمپیوٹر کمپیوٹر اسکرین پر شناخت شدہ پوائنٹس کو امیج پوائنٹس کی شکل میں دکھاتا ہے۔ ایک مکمل تصویر بنانے کے لیے، آپٹیکل پاتھ میں سکیننگ سسٹم نمونے کے فوکل ہوائی جہاز پر سکین کرتا ہے تاکہ ایک مکمل کنفوکل امیج بنایا جا سکے۔ جب تک اسٹیج Z محور کے ساتھ اوپر اور نیچے جاتا ہے، نمونے کی ایک نئی پرت کو کنفوکل ہوائی جہاز میں منتقل کیا جاتا ہے، اور نمونے کی نئی پرت کو مانیٹر پر امیج کیا جاتا ہے۔ Z محور کی مسلسل حرکت کے ساتھ، نمونے کی مختلف تہوں کی مسلسل تصاویر حاصل کی جا سکتی ہیں۔ ہلکی کٹی تصویر۔
روایتی روشنی خوردبین کے درمیان فرق
روایتی فلوروسینس خوردبینوں میں ایک ناقابل تسخیر کمی ہے: فوکل طیارے کے باہر فلوروسینٹ ڈھانچے دھندلے اور دھندلے ہیں۔ وجہ یہ ہے کہ زیادہ تر حیاتیاتی نمونوں میں اوورلیپنگ ڈھانچے ہوتے ہیں۔ اگر فلوروسینٹ لیبل والے ڈھانچے کو مختلف سطحوں پر تقسیم کیا جاتا ہے اور اوورلیپ کیا جاتا ہے، تو فوکل جہاز کے اوپر یا نیچے سے بکھرے ہوئے فلوروسینس کو بھی معروضی لینس کے ذریعے موصول ہوتا ہے، اور فلوروسینس مائکروسکوپ کی ریزولوشن بہت بہتر ہو جائے گی۔ کم.
روایتی آپٹیکل مائیکروسکوپس کی بنیاد پر، لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپس لیزر لائٹ کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتی ہیں، کنجوگیٹ فوکسنگ کے اصول اور ڈیوائس کو اپناتی ہیں، اور مشاہدہ شدہ اشیاء کی ڈیجیٹل امیج پروسیسنگ، مشاہدہ، تجزیہ اور آؤٹ پٹ انجام دینے کے لیے کمپیوٹر کا استعمال کرتی ہیں۔ خلیات کے تین جہتی مقامی ڈھانچے کے غیر تباہ کن مشاہدے اور تجزیہ کے لیے نمونے کو ٹوموگرافی طور پر اسکین اور امیج کیا جا سکتا ہے۔ ایک ہی وقت میں، امیونو فلوروسینٹ لیبلنگ اور آئن فلوروسینٹ لیبلنگ پروبس کا استعمال کرتے ہوئے، یہ ٹیکنالوجی نہ صرف فکسڈ سیلز اور ٹشو سیکشنز کا مشاہدہ کر سکتی ہے، بلکہ جاندار خلیوں کی ساخت، مالیکیولز، آئنوں اور زندگی کی سرگرمیوں کا حقیقی وقت میں متحرک مشاہدہ اور پتہ بھی لگا سکتی ہے۔ ذیلی خلوی سطح پر جسمانی سگنلز جیسے Ca2 پلس، pH قدر، جھلی کی صلاحیت اور سیل مورفولوجی میں تبدیلیوں کا مشاہدہ، مورفولوجی، مالیکیولر سیل بائیولوجی، نیورو سائنس، فارماکولوجی، اور جینیات کے شعبوں میں طاقتور تحقیقی ٹولز کی نئی نسل بن گیا ہے۔
