فلوروسینس مائکروسکوپ کی خصوصی ساخت میں شامل ہیں:
(I) کلر فلٹر سسٹم
رنگین فلٹر فلوروسینس مائیکروسکوپ کا ایک اہم حصہ ہے، اس کے بنیادی اجزاء جوش لائٹ فلٹر (پہلا بیریئر فلٹر)، ایمیشن لائٹ فلٹر (سیکنڈ بیریئر فلٹر) اور آدھا شفاف اور آدھا اینٹی فلٹر (بیم اسپلٹنگ مرر) کمپوزیشن ہے۔ . رنگ فلٹر ماڈل کے مختلف مینوفیکچررز، نام اکثر وردی نہیں ہے.
1. ایکسائٹیشن لائٹ فلٹر اور ایمیشن لائٹ فلٹر: روشنی کے منبع اور فلورو کروم کی خصوصیات کے مطابق، عام طور پر مندرجہ ذیل تین قسم کے ملاپ کا انتخاب کریں، جوش کی روشنی کی ایک مخصوص طول موج کی حد فراہم کرنے کے لیے، اور فلوروسینس کے نمونے کے ذریعے جوش پیدا کریں۔ امیجنگ کے لیے آئی پیس۔
UV اتیجیت: اتیجیت لائٹ فلٹر UV روشنی کی ترسیل کی اجازت دیتا ہے اور 400nm سے اوپر نظر آنے والی روشنی کے گزرنے کو روکتا ہے۔ متعلقہ اخراج فلٹر نیلی روشنی کے گزرنے کی اجازت دیتا ہے، جو کہ منظر کے میدان میں نیلی نظر آتی ہے، مثلاً DAPI کے داغ کے لیے۔
نیلی روشنی کا جوش: جوش کی روشنی کا فلٹر نیلی روشنی کو گزرنے دیتا ہے، روشنی کی دیگر طول موجوں کو روکتا ہے۔ متعلقہ اخراج فلٹر سبز روشنی کے گزرنے کی اجازت دیتا ہے، مثلاً GFP سٹیننگ مارکر کے لیے۔
سبز اتیجیت: جوش کا فلٹر سبز روشنی کو گزرنے دیتا ہے، دوسری طول موج کو روکتا ہے۔ متعلقہ اخراج فلٹر عام طور پر سرخ روشنی کو گزرنے دیتا ہے، مثلاً روڈامین سٹیننگ۔
2. آدھا شفاف اور آدھا عکاس فلٹر: اس کا کردار انعکاس کے ذریعے روشنی کے جوش کو مکمل طور پر روکنا ہے۔ اور خارج ہونے والی روشنی کی متعلقہ طول موج کی حد کے ذریعے۔ اس کا ماڈل اور روشنی کے فلٹرز کی جوش اور روشنی کے فلٹرز کے اخراج کے مساوی ہیں۔
(B) معروضی لینس اور آئی پیس
مختلف قسم کے معروضی لینس لگائے جاسکتے ہیں، لیکن * سڈول، رنگین آبجیکٹیو لینس کا اچھا انتخاب، کیونکہ اس کے آٹو فلوروسینس بہت چھوٹا ہے اور لائٹ ٹرانسمیشن کی خصوصیات (طول موج کی حد) فلوروسینس کے لیے موزوں ہے۔ چونکہ مائیکروسکوپ فیلڈ آف ویو میں امیج کی فلوروسینس برائٹنس مقصد کی توتن کی شرح کے مربع کے متناسب ہے اور اس کی میگنیفیکیشن کے الٹا متناسب ہے، اس لیے فلوروسینس امیج کی چمک کو بہتر بنانے کے لیے، بڑے توتن کی شرح کے ساتھ مقصد کو ہونا چاہیے۔ استعمال کیا جائے خاص طور پر مائدیپتی کے لئے کافی مضبوط نمونوں نہیں ہے، ایک بڑے منہ کی شرح، اعلی روشنی ٹرانسمیشن مقصد، eyepiece کے ساتھ ممکن حد تک کم کے ساتھ استعمال کرنا چاہئے.
(C) دیگر آپٹیکل آلات
ریفلیکٹر، اس کی عکاس پرت عام طور پر ایلومینیم چڑھایا جاتا ہے، کیونکہ الٹرا وائلٹ پر ایلومینیم اور نیلے بنفشی خطے کی نظر آنے والی روشنی کو کم جذب کرتا ہے، 90% یا اس سے زیادہ تک منعکس کرتا ہے (جبکہ چاندی کی عکاسی صرف 70% ہے)۔ فلیٹ ریفلیکٹرز عام طور پر استعمال ہوتے ہیں۔ اسپاٹ لائٹ آئینہ، خاص طور پر فلوروسینس مائیکروسکوپی اسپاٹ لائٹ آئینے کے لیے ڈیزائن اور تیار کیا گیا ہے جو کوارٹج گلاس یا دوسرے UV-شفاف شیشے سے بنا ہے۔ گرنے والی روشنی کا آلہ، جو منتقلی روشنی کے منبع کے کام کے علاوہ، مبہم اور پارباسی نمونوں، جیسے موٹی فلم، فلٹر جھلی، کالونی، ٹشو کلچر اور براہ راست مشاہدے کے لیے دیگر نمونوں کے لیے زیادہ موزوں ہے۔ حالیہ برسوں میں، گرنے والی روشنی کے آلے کا استعمال کرتے ہوئے فلوروسینس مائکروسکوپ کی ایک نئی قسم کی ترقی، جسے گرنے والی فلوروسینس مائکروسکوپ کہتے ہیں۔
(D) روشنی کا ذریعہ
آج کل، 50 یا 100W ہائی پریشر مرکری لیمپ روشنی کے منبع کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ پارے کے بخارات کی وجہ سے دو الیکٹروڈ خارج ہونے والے مادہ کا کام، ہوا کے دباؤ کی گیند تیزی سے بڑھتی ہے (اس عمل میں عام طور پر تقریباً 5 ~ 15 منٹ لگتے ہیں)، اور روشنی کے کوانٹا کے اخراج کے عمل میں، جاری ہونے والی روشنی کی طول موج پرجوش ہونے کے لیے کافی ہوتی ہے۔ فلوروسینٹ مادہ کی تمام اقسام، لہذا، فلوروسینس مائکروسکوپی کے لئے عام طور پر استعمال کیا جاتا ہے.
مرکری لیمپ کی سروس کی زندگی نسبتاً مختصر ہوتی ہے، عام طور پر 200 گھنٹے، اور اس سروس لائف کی حد کے جواب میں، حالیہ برسوں میں، ایک نیا فلوروسینٹ لائٹ سورس، X-Cite، اس کی 2000hrs طویل لیمپ لائف اور اس کے لچکدار استعمال کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے۔ - پہلے سے گرم کرنے کی ضرورت نہیں ہے، اور یہ باکس کے بالکل باہر استعمال کے لیے تیار ہے۔
