ان کی روشنی کے راستوں کی بنیاد پر فلوروسینس خوردبین کی دو قسمیں ہیں۔
1. ٹرانسمیشن فلوروسینس مائیکروسکوپ: فلوروسینس کو اکسانے کے لیے اتیجیت روشنی کا ماخذ ایک کنڈینسر کے ذریعے نمونے کے مواد سے گزرتا ہے۔ ایک ڈارک فیلڈ کلیکٹر عام طور پر استعمال کیا جاتا ہے، یا ایک عام کلیکٹر استعمال کیا جا سکتا ہے، اور ریفلیکٹر کو جوش کی روشنی کو نمونے کی طرف موڑنے اور سائیڈ ریڈیٹ کرنے کے لیے ایڈجسٹ کیا جاتا ہے۔ یہ ایک پرانا فلوروسینس خوردبین ہے۔ فائدہ یہ ہے کہ فلوروسینس کم میگنیفیکیشن پر مضبوط ہے، لیکن نقصان یہ ہے کہ میگنیفیکیشن بڑھنے پر فلوروسینس کمزور ہو جاتا ہے۔ لہذا، بڑے نمونہ مواد کا مشاہدہ کرنا بہتر ہے.
2. Epi-fluorescence microscope جدید دور میں تیار کی گئی فلوروسینس مائکروسکوپ کی ایک نئی قسم ہے۔ اوپر سے فرق یہ ہے کہ جوش کی روشنی آبجیکٹیو لینس سے نمونہ کی سطح پر نیچے کی طرف گرتی ہے، یعنی وہی آبجیکٹیو لینس الیومینیشن کنڈینسر اور فلوروسینس کو جمع کرنے کے لیے مقصدی لینس کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ آپٹیکل پاتھ میں دو رنگوں کے بیم سپلٹر کو شامل کرنے کی ضرورت ہے، جو آپٹیکل یورینیم کے ساتھ 45 فیصد ہے۔ زاویہ، جوش کی روشنی معروضی لینس میں منعکس ہوتی ہے اور نمونے پر مرکوز ہوتی ہے۔ نمونے سے پیدا ہونے والا فلوروسینس اور معروضی لینس کی سطح اور کور شیشے کی سطح سے منعکس ہونے والی اتیجیت روشنی ایک ہی وقت میں معروضی لینس میں داخل ہوتی ہے اور ڈائی کرومیٹک بیم اسپلٹر پر واپس آتی ہے، تاکہ جوش کی روشنی فلوروسینس سے الگ ہو جائے، بقایا جوش اس کے بعد روشنی کو بلاک کرنے والے فلٹر کے ذریعے جذب کیا جاتا ہے۔ اگر آپ مختلف ایکسائٹیشن فلٹر/ڈول کلر بیم اسپلٹر/بلاکنگ فلٹر امتزاج داخل کرتے ہیں، تو آپ مختلف فلوروسینس ری ایکشن مصنوعات کی ضروریات کو پورا کر سکتے ہیں۔ اس قسم کی فلوروسینس مائکروسکوپ کا فائدہ یہ ہے کہ منظر کا میدان یکساں طور پر روشن ہوتا ہے، تصویر واضح ہوتی ہے، اور جتنی زیادہ میگنیفیکیشن ہوتی ہے، فلوروسینس اتنا ہی مضبوط ہوتا ہے۔
(2) فلوروسینس مائکروسکوپ کا استعمال کیسے کریں۔
1. روشنی کا منبع آن کریں، اور انتہائی ہائی پریشر والے مرکری لیمپ کو اپنے روشن ترین مقام تک پہنچنے کے لیے کئی منٹوں تک گرم ہونے کی ضرورت ہے۔
2. ٹرانسمیشن فلوروسینس مائیکروسکوپس کو روشنی کے منبع اور کنڈینسر کے درمیان مطلوبہ اتیجیت فلٹر نصب کرنے کی ضرورت ہوتی ہے، اور اسی طرح کے بلاکنگ فلٹر کو مقصدی لینس کے پیچھے نصب کیا جانا ہوتا ہے۔ Epi-fluorescence microscopes کو روشنی کے راستے کے سلاٹ میں مطلوبہ ایکسائٹیشن فلٹر/ڈبل کلر بیم اسپلٹر/بلاکنگ فلٹر داخل کرنے کی ضرورت ہے۔
3. مشاہدہ کرنے کے لیے کم میگنیفیکیشن مائکروسکوپ کا استعمال کریں، اور روشنی کے منبع کے مرکز کو فلوروسینس مائکروسکوپ کے مختلف ماڈلز کے ایڈجسٹمنٹ آلات کے مطابق ایڈجسٹ کریں تاکہ یہ پوری روشنی کی جگہ کے مرکز میں واقع ہو۔
4. نمونہ کا ٹکڑا رکھیں اور مشاہدہ کرنے کے لیے فوکس کو ایڈجسٹ کریں۔ براہ کرم استعمال کے دوران توجہ دیں: آنکھ کو پہنچنے والے نقصان سے بچنے کے لیے فلٹر کو براہ راست اپنی آنکھوں سے نہ دیکھیں۔ آئل لینس سے نمونے کا مشاہدہ کرتے وقت، آپ کو ایک خاص غیر فلوروسینٹ آئل لینس استعمال کرنا چاہیے؛ ہائی پریشر مرکری لیمپ کو بند کرنے کے فوراً بعد دوبارہ نہیں کھولا جا سکتا۔ اسے 5 منٹ کے بعد دوبارہ شروع کیا جا سکتا ہے، ورنہ یہ غیر مستحکم ہو جائے گا اور مرکری لیمپ کی زندگی کو متاثر کرے گا۔
(3) نیلے وایلیٹ لائٹ فلٹر کا استعمال کرتے ہوئے تدریسی پلیٹ فارم پر فلوروسینس مائکروسکوپ کے نیچے مشاہدہ کریں۔ یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ گزرنا o ہے۔ 01% ایکریڈائن اورنج فلوروسینٹ ڈائی سے داغے ہوئے خلیوں میں، نیوکلئس اور سائٹوپلازم فلوروسینس کے دو مختلف رنگوں (گہرا سبز اور نارنجی سرخ) پیدا کرنے کے لیے پرجوش ہیں۔
