ان کے نظری راستے کے حوالے سے فلوروسینس خوردبین کی دو قسمیں ہیں:
1. ٹرانسمیشن فلوروسینس مائکروسکوپ: اتیجیت روشنی کا ذریعہ مائدیپتی کو متحرک کرنے کے لئے نمونہ کے مواد کے ذریعے کمڈینسر آئینے کے ذریعے ہے۔ عام طور پر استعمال ہونے والے ڈارک فیلڈ کلیکٹر کو عام کلیکٹر بھی استعمال کیا جا سکتا ہے، ریفلیکٹر کو ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے تاکہ جوش کی روشنی منتقل ہو اور نمونے کو نظرانداز کر سکے۔ یہ فلوروسینس مائکروسکوپ کی پرانی قسم ہے۔ فائدہ یہ ہے کہ فلوروسینس کم میگنیفیکیشن پر مضبوط ہے، اور نقصان یہ ہے کہ میگنیفیکیشن میں اضافے کے ساتھ فلوروسینس کمزور ہو جاتا ہے۔ لہذا یہ بہتر ہے کہ بڑے نمونے کے مواد کا مشاہدہ کیا جائے۔
2. گرنے والی قسم کی فلوروسینس مائیکروسکوپ یہ حالیہ دنوں میں تیار کی گئی فلوروسینس مائکروسکوپ کی ایک نئی قسم ہے، اور فرق یہ ہے کہ معروضی لینس سے نمونے کی سطح تک روشنی کا جوش، یعنی وہی معروضی لینس۔ مرتکز کی روشنی اور فلوروسینس مقصدی لینس کا مجموعہ۔ آپٹیکل پاتھ کو دو رنگوں کے بیم سے جدا کرنے والے میں شامل کرنے کی ضرورت ہے، جو کہ روشنی کے یورینیم کے ساتھ 45. زاویہ ہے، جوش کی روشنی معروضی لینس میں منعکس ہوتی ہے، اور نمونے میں جمع ہوتی ہے، نمونے کے ذریعہ تیار کردہ فلوروسینس اور مقصد لینس لینس کی سطح، ایک ہی وقت میں معروضی لینس میں جوش کی روشنی کے شیشے کی سطح کی عکاسی کا احاطہ کریں، اور دو رنگوں کے بیم جداکار پر واپس جائیں، تاکہ جوش کی روشنی اور فلوروسینس بقایا جوش کی روشنی سے الگ ہو جائیں اور پھر جذب ہو جائیں۔ مسدود کرنے والے فلٹرز۔ اگر آپ مختلف ایکسائٹیشن فلٹر / ڈوئل کلر بیم سیپریٹر / بلاکنگ فلٹر کمبی نیشن بلاک کو تبدیل کرتے ہیں تو مختلف فلوروسینس ری ایکشن پروڈکٹس کی ضروریات کو پورا کرسکتے ہیں۔ اس فلوروسینس مائیکروسکوپ کے فوائد یکساں روشنی، واضح امیجنگ، فلوروسینس کی جتنی زیادہ میگنیفیکیشن زیادہ مضبوط ہوتی ہے، کا میدان ہے۔
(B) فلوروسینس خوردبین کا طریقہ۔
1. روشن ترین مقام تک پہنچنے کے لیے روشنی کا منبع، انتہائی ہائی پریشر مرکری لیمپ کو چند منٹوں کے لیے پہلے سے گرم کرنے کے لیے کھولیں۔
2. ٹرانسمیشن فلوروسینس مائیکروسکوپ کو روشنی کے منبع اور فلٹر کو متحرک کرنے کے لیے درکار کنسنٹیٹر کے درمیان نصب کرنے کی ضرورت ہے، متعلقہ بلاکنگ فلٹر کے ساتھ مقصدی لینس کے پیچھے۔ گرتی ہوئی فلوروسینس مائیکروسکوپ کو مطلوبہ ایکسائٹیشن فلٹر / ڈوئل کلر بیم سیپریٹر / بلاکنگ فلٹر انسرٹس کے آپٹیکل پاتھ کے سلاٹ میں داخل کرنے کی ضرورت ہے۔
3. کم میگنیفیکیشن لینس کے ساتھ مشاہدہ کریں اور روشنی کے منبع کے مرکز کو ایڈجسٹ کریں تاکہ یہ فلوروسینس مائکروسکوپ کے مختلف ماڈلز کے ایڈجسٹ کرنے والے آلے کے مطابق پوری روشنی کی جگہ کے مرکز میں واقع ہو۔
4. نمونہ ٹکڑا رکھیں، توجہ مرکوز کا مشاہدہ کیا جا سکتا ہے. استعمال پر توجہ دینا چاہئے: فلٹرز کی تنصیب کے اختتام پر براہ راست مشاہدہ کرنے کے لئے آنکھ کا استعمال نہ کریں، تاکہ آنکھ کو نقصان نہ پہنچے۔ نمونے کا مشاہدہ کرنے کے لیے تیل کے آئینے کے ساتھ، آپ کو ایک خاص نان فلوروسینٹ آئل آئینے کا استعمال کرنا چاہیے۔ ہائی پریشر مرکری لیمپ کو بند ہونے کے فوراً بعد دوبارہ نہیں کھولا جا سکتا، آپ کو دوبارہ شروع کرنے سے پہلے 5 منٹ ہونے کی ضرورت ہے، ورنہ یہ غیر مستحکم ہو جائے گا، جس سے مرکری لیمپ کی زندگی متاثر ہو گی۔
(C) مشاہدہ ایک نیلے وایلیٹ لائٹ فلٹر کے ساتھ تدریسی مرحلے پر فلوروسینس مائکروسکوپ کے تحت، امیڈین اورنج فلوروسینٹ ڈائی کے o.01% سے داغے ہوئے خلیات کو دیکھا جا سکتا ہے، اور خلیات کے نیوکلئس اور سائٹوپلازم پرجوش ہوتے ہیں کہ وہ دو مختلف مواد پیدا کر سکیں۔ فلوروسینس کے رنگ (گہرا سبز اور نارنجی سرخ)۔
