فلوروسینس اور لیزر کنفوکل مائکروسکوپی میں کیا فرق ہے؟
فلوروسینس خوردبین
1. فلوروسینس مائیکروسکوپ ایک ایسا آلہ ہے جو الٹراوائلٹ روشنی کو روشنی کے ذریعہ کے طور پر استعمال کرتا ہے تاکہ جانچ کی جا رہی چیز کو روشن کیا جا سکے، جس کی وجہ سے یہ فلوروسینس خارج کرتا ہے، اور پھر خوردبین کے نیچے آبجیکٹ کی شکل اور پوزیشن کا مشاہدہ کرتا ہے۔ فلوروسینس مائیکروسکوپی کا استعمال خلیات کے اندر موجود مادوں کے جذب، نقل و حمل، تقسیم اور لوکلائزیشن کا مطالعہ کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ خلیات میں کچھ مادے، جیسے کہ کلوروفیل، الٹرا وایلیٹ تابکاری کے سامنے آنے کے بعد فلوروسینس کا اخراج کر سکتے ہیں۔ کچھ مادے خود فلوروسینس کا اخراج نہیں کرسکتے ہیں، لیکن اگر فلوروسینٹ رنگوں یا فلوروسینٹ اینٹی باڈیز سے داغے ہوئے ہوں، تو وہ بالائے بنفشی تابکاری کے تحت فلوروسینس کا اخراج بھی کرسکتے ہیں۔ فلوروسینس مائیکروسکوپی ان مادوں پر گتاتمک اور مقداری تحقیق کے آلات میں سے ایک ہے۔
2. فلوروسینس مائکروسکوپ کا اصول:
(A) روشنی کا منبع: روشنی کا منبع مختلف طول موجوں کی روشنی خارج کرتا ہے (الٹرا وایلیٹ سے انفراریڈ تک)۔
(B) اتیجیت فلٹر روشنی کا ذریعہ: ایک مخصوص طول موج کی روشنی کو منتقل کرنا جو نمونہ میں فلوروسینس پیدا کر سکتا ہے، جبکہ روشنی کو روکتا ہے جو حوصلہ افزائی فلوروسینس کے لیے بیکار ہے۔
(C) فلوروسینٹ نمونے: عام طور پر فلوروسینٹ روغن سے داغے ہوتے ہیں۔
(D) بلاک کرنے والا فلٹر: اتیجیت روشنی کو بلاک کرکے منتخب طور پر فلوروسینس منتقل کرتا ہے جو نمونہ کے ذریعے جذب نہیں کیا گیا ہے، اور کچھ طول موجیں بھی منتخب طور پر فلوروسینس میں منتقل ہوتی ہیں۔ ایک خوردبین جو بالائے بنفشی روشنی کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتی ہے تاکہ شعاع زدہ شے سے فلوروسینس کا اخراج ہو۔ الیکٹران خوردبین کو پہلی بار 1931 میں برلن، جرمنی میں نار اور ہاروسکا نے جمع کیا تھا۔ اس قسم کی خوردبین روشنی کی شہتیر کی بجائے تیز رفتار الیکٹران بیم کا استعمال کرتی ہے۔ روشنی کی لہروں کے مقابلے الیکٹران کے بہاؤ کی بہت کم طول موج کی وجہ سے، الیکٹران خوردبین کی میگنیفیکیشن 800000 گنا تک پہنچ سکتی ہے، جس کی کم از کم ریزولوشن کی حد 0.2 نینو میٹر ہے۔ اسکیننگ الیکٹران مائکروسکوپ، جو 1963 میں استعمال ہونے لگی تھی، لوگوں کو اشیاء کی سطح پر چھوٹے ڈھانچے کو دیکھنے کی اجازت دیتی ہے۔
3. درخواست کا دائرہ: چھوٹی اشیاء کی تصاویر کو بڑا کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ عام طور پر حیاتیات، طب، خوردبینی ذرات وغیرہ کے مشاہدے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔
confocal خوردبین
1. ایک کنفوکل مائکروسکوپ منعکس روشنی کے راستے میں ایک نیم عکاس لینس کا اضافہ کرتا ہے، جو منعکس روشنی کو موڑ دیتا ہے جو پہلے ہی لینس سے دوسری سمتوں میں گزر چکی ہے۔ اس کے فوکل پوائنٹ پر پن ہول کے ساتھ ایک چکرا ہے، اور چھوٹا سوراخ فوکل پوائنٹ پر واقع ہے۔ چکرانے کے پیچھے ایک فوٹو ملٹی پلیئر ٹیوب ہے۔ یہ تصور کیا جا سکتا ہے کہ پتہ لگانے والی روشنی کے فوکل پوائنٹ سے پہلے اور بعد میں منعکس ہونے والی روشنی کو اس کنفوکل سسٹم کے ذریعے چھوٹے سوراخ پر فوکس نہیں کیا جا سکتا اور اسے چکرا کر بلاک کر دیا جائے گا۔ لہذا فوٹو میٹر فوکل پوائنٹ پر منعکس روشنی کی شدت کی پیمائش کرتا ہے۔
2. اصول: روایتی نظری خوردبینیں فیلڈ لائٹ ذرائع کا استعمال کرتی ہیں، اور نمونے پر موجود ہر نقطہ کی تصویر پڑوسی پوائنٹس سے پھیلنے والی روشنی یا بکھری ہوئی روشنی سے متاثر ہوگی۔ لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپ نمونے کے فوکل جہاز میں ہر نقطہ کو اسکین کرنے کے لیے ایک روشن پن ہول کے ذریعے ایک نقطہ روشنی کا ذریعہ بنانے کے لیے لیزر بیم کا استعمال کرتی ہے۔ نمونے کے روشن نقطہ کو پتہ لگانے والے پن ہول پر امیج کیا جاتا ہے، اور پتہ لگانے والے پن ہول کے بعد فوٹو ملٹی پلیئر ٹیوب (PMT) یا تھرمو الیکٹرک کپلنگ ڈیوائس (cCCD) کے ذریعے پوائنٹ یا لائن کے ذریعے موصول ہوتا ہے، کمپیوٹر مانیٹر پر تیزی سے فلوروسینٹ امیج بناتا ہے۔ سکرین الیومینیشن پن ہول اور ڈٹیکشن پن ہول معروضی لینس کے فوکل ہوائی جہاز کے مقابلے میں جوڑے ہوئے ہیں۔ فوکل ہوائی جہاز کے پوائنٹس بیک وقت الیومینیشن پن ہول اور ایمیشن پن ہول پر مرکوز ہوتے ہیں، اور فوکل ہوائی جہاز کے باہر کے پوائنٹس کا پتہ لگانے والے پن ہول پر نہیں کیا جائے گا۔ اس کے نتیجے میں ایک کنفوکل امیج بنتا ہے جو نمونہ کے آپٹیکل کراس سیکشن کی نمائندگی کرتا ہے، روایتی مائیکروسکوپی میں دھندلی امیجز کی خرابی پر قابو پاتا ہے۔
3. درخواست کے شعبے: ادویات، جانوروں اور پودوں کی تحقیق، بائیو کیمسٹری، بیکٹیریاولوجی، سیل بائیولوجی، ٹشو اینڈ ایمبریو، فوڈ سائنس، جینیٹکس، فارماسولوجی، فزیالوجی، آپٹکس، پیتھالوجی، باٹنی، نیورو سائنس، میرین بائیولوجی، میٹریل سائنس، الیکٹرانک سائنس، مکینکس، پیٹرولیم ارضیات، اور معدنیات۔
