آپ کو کنفوکل مائکروسکوپ استعمال کرنے کی ضرورت کیوں ہے؟
1. نظری خوردبینیں ہمارے عظیم پیشروؤں کی کوششوں اور بہتری کے ذریعے کمال کی حالت میں پہنچ چکی ہیں۔ درحقیقت، عام خوردبین ہمیں آسانی سے اور جلدی سے خوبصورت خوردبین تصاویر فراہم کر سکتی ہیں۔ تاہم، ایک ایسا واقعہ پیش آیا جس نے مائیکروسکوپی کی اس تقریباً کامل دنیا میں انقلابی جدت لائی۔ یہ "لیزر اسکیننگ کنفوکل مائکروسکوپ" کی ایجاد تھی۔ اس نئی قسم کی مائیکروسکوپ کی خصوصیت یہ ہے کہ اس میں ایک ایسا آپٹیکل سسٹم استعمال کیا گیا ہے جو تصویر کی معلومات کو صرف اس سطح پر نکالتا ہے جہاں فوکس ہوتا ہے، اور فوکس کو تبدیل کرتے ہوئے حاصل شدہ معلومات کو امیج میموری میں بحال کرتا ہے، اس طرح مکمل تھری ڈی معلومات حاصل ہوتی ہیں۔ ذہانت کی ایک واضح تصویر۔ اس طریقے کے ذریعے سطح کی اس شکل کے بارے میں معلومات جس کی عام خوردبین سے تصدیق نہیں کی جا سکتی ہے آسانی سے حاصل کی جا سکتی ہے۔ اس کے علاوہ، عام نظری خوردبینوں کے لیے، "بڑھتی ہوئی ریزولوشن" اور "فوکس کی گہرائی کو گہرا کرنا" متضاد حالات ہیں، خاص طور پر اعلی میگنیفیکیشنز پر۔ تاہم، confocal مائکروسکوپی میں، یہ مسئلہ آسانی سے حل کیا جاتا ہے.
2. کنفوکال آپٹیکل سسٹم کے فوائد
کنفوکل آپٹیکل سسٹم نمونے پر پوائنٹ الیومینیشن کرتا ہے، اور منعکس ہونے والی روشنی روشنی کو حاصل کرنے کے لیے پوائنٹ ریسیپٹر کا بھی استعمال کرتی ہے۔ جب نمونہ فوکس پوزیشن پر رکھا جاتا ہے، تو تقریباً تمام منعکس شدہ روشنی فوٹو ریسیپٹر تک پہنچ سکتی ہے۔ جب نمونہ توجہ سے باہر ہوتا ہے، تو منعکس شدہ روشنی فوٹو ریسیپٹر تک نہیں پہنچ سکتی۔ دوسرے لفظوں میں، کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، صرف وہی تصویر جو فوکس کے ساتھ ملتی ہے آؤٹ پٹ ہوگی، اور روشنی کے دھبوں اور بیکار بکھری ہوئی روشنی کو ڈھال دیا جائے گا۔
3. لیزر کیوں استعمال کریں؟
کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، نمونہ ایک نقطہ پر روشن ہوتا ہے، اور منعکس روشنی بھی ایک پوائنٹ فوٹو ریسیپٹر کا استعمال کرتے ہوئے موصول ہوتی ہے۔ لہذا، نقطہ روشنی کے ذرائع ضروری ہو جاتے ہیں. لیزر بہت ہی نقطہ روشنی کے ذرائع ہیں۔ زیادہ تر معاملات میں، کنفوکال خوردبین کا روشنی کا ذریعہ لیزر روشنی کے ذرائع کا استعمال کرتا ہے۔ اس کے علاوہ، لیزر کی خصوصیات جیسے یک رنگی، ڈائرکٹیوٹی، اور بہترین بیم کی شکل بھی اس کے وسیع پیمانے پر اپنانے کی اہم وجوہات ہیں۔
4. تیز رفتار سکیننگ پر مبنی حقیقی وقت کا مشاہدہ ممکن ہو جاتا ہے۔
لیزر اسکیننگ کے لیے، افقی سمت میں ایک صوتی آپٹیکل ڈیفلیکٹر (AO عنصر) استعمال کیا جاتا ہے اور عمودی سمت میں سروو الیکٹریکل کنٹرولڈ بیم اسکیننگ مرر (Servo Galvano-mirror) استعمال کیا جاتا ہے۔ چونکہ صوتی-آپٹیکل ڈیفلیکشن یونٹ میں مکینیکل وائبریشن کا حصہ نہیں ہوتا ہے، اس لیے یہ تیز رفتاری سے اسکین کر سکتا ہے، جس سے مانیٹرنگ اسکرین پر حقیقی وقت کا مشاہدہ ممکن ہو جاتا ہے۔ اس قسم کی امیجنگ کی تیز رفتار ایک بہت اہم چیز ہے جو توجہ مرکوز کرنے اور پوزیشن حاصل کرنے کی رفتار کو براہ راست متاثر کرتی ہے۔
5. فوکس پوزیشن اور چمک کے درمیان تعلق
کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، چمک زیادہ سے زیادہ ہوتی ہے جب نمونے کو فوکس پوزیشن پر صحیح طریقے سے رکھا جاتا ہے، اور اس کی چمک اس کے آگے اور پیچھے تیزی سے کم ہو جائے گی (شکل 4 میں ٹھوس لکیر)۔ فوکل ہوائی جہاز کی یہ حساس سلیکٹیوٹی بھی اونچائی کی سمت کے تعین اور کنفوکل مائکروسکوپ کے فوکس گہرائی کی توسیع کے پیچھے اصول ہے۔ اس کے برعکس، ایک عام آپٹیکل مائکروسکوپ میں فوکس پوزیشن سے پہلے اور بعد میں چمک کی واضح تبدیلیاں نہیں ہوتی ہیں (شکل 4 میں ڈاٹڈ لائن)۔
6. ہائی کنٹراسٹ اور ہائی ریزولوشن
عام آپٹیکل خوردبینوں میں، فوکس کے باہر سے منعکس ہونے والی روشنی فوکس امیجنگ والے حصے کے ساتھ مداخلت اور اوورلیپ کرے گی، جس کے نتیجے میں تصویر کے تضاد میں کمی واقع ہوگی۔ اس کے برعکس، کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، فوکس سے باہر کی آوارہ روشنی اور معروضی لینس کے اندر کی آوارہ روشنی تقریباً مکمل طور پر ہٹا دی جاتی ہے، اس لیے بہت زیادہ کنٹراسٹ والی تصویر حاصل کی جا سکتی ہے۔ اس کے علاوہ، کیونکہ روشنی دو بار معروضی لینس سے گزرتی ہے، اس لیے پوائنٹ امیج کو تیز کیا جاتا ہے، جس سے خوردبین کی حل کرنے کی طاقت بھی بہتر ہوتی ہے۔
