آئل لینس کی میگنیفیکیشن عام مقصدی لینس سے زیادہ کیوں ہے؟
مائکروبیولوجیکل تجربات میں داغ لگانے سے پہلے بیکٹیریا کو ٹھیک کرنے کی ضرورت کی وجوہات:
1: خلیات کو مارتا ہے، رنگنے سے داغ لگانا آسان ہے۔
2: بیکٹیریا کو شیشے کی سلائیڈ پر لگائیں، اور اسے پانی سے دھونا آسان نہیں ہے۔
ٹھیک کرتے وقت، اسے آہستہ آہستہ خشک کیا جانا چاہئے. اگر آپ واقعی تیز کرنا چاہتے ہیں، تو آپ اسے الکحل کے چراغ کے شعلے کے اوپر فاصلے پر چند بار خشک کر سکتے ہیں۔ شیشے کی سلائیڈ کو گرم نہ ہونے دیں، ورنہ یہ بیکٹیریا کی زندگی کو ختم کر سکتا ہے۔
گرام داغ اور بیکٹیریا کا خوردبین مشاہدہ
1. تجرباتی اصول
گرام داغدار اصول: بیکٹیریا اپنی سیل کی دیواروں کی ساخت اور ساخت کی وجہ سے گرام کے داغ کو مختلف طریقے سے جواب دیتے ہیں۔ گرام پازیٹو بیکٹیریا کی سیل وال بنیادی طور پر ایک نیٹ ورک گرہ ہے جو پیپٹائڈوگلیکن کے ذریعے بنتی ہے۔ ایتھنول کے ساتھ علاج کرنے پر، پانی کی کمی کی وجہ سے نیٹ ورک کی ساخت کا تاکنا سائز چھوٹا ہو جاتا ہے، اور پارگمیتا کم ہو جاتی ہے، جس سے کرسٹل وایلیٹ آئوڈین کے کمپلیکس کو سیل میں خارج کرنا اور برقرار رکھنا آسان نہیں ہوتا، اور نیلے رنگ پرائمری سٹیننگ ایجنٹ کا ارغوانی رنگ اب بھی ڈی کلرائزیشن اور کاؤنٹر سٹیننگ کے بعد برقرار ہے۔ گرام منفی بیکٹیریا کی خلیے کی دیوار کی پیپٹائڈوگلیان پرت پتلی ہوتی ہے اور اس میں لپڈ کا مواد زیادہ ہوتا ہے، اس لیے جب رنگین علاج کیا جاتا ہے، تو لپڈ ایتھنول (یا ایسیٹون) کے ذریعے تحلیل ہوجاتا ہے، اور خلیے کی دیوار کی پارگمیتا بڑھ جاتی ہے۔ کہ کرسٹل وائلٹ آئوڈین کے کمپلیکس کو خارج کرنا آسان ہے، اور کاؤنٹر سٹین کے ساتھ کاونٹر سٹین کرنے کے بعد، خلیات کاؤنٹر سٹین کے سرخ رنگ سے داغدار ہو جاتے ہیں۔ مائیکروسکوپ امیجنگ اصول: جدید عام آپٹیکل خوردبین تصویر کو بڑا کرنے کے لیے آئی پیس اور معروضی لینس کے دو لینس سسٹم استعمال کرتی ہیں، اس لیے انھیں اکثر کمپاؤنڈ خوردبین کہا جاتا ہے۔ خوردبین کے نظری نظام میں، معروضی لینس کی کارکردگی سب سے اہم ہوتی ہے، اور تیل کے لینس کی میگنیفیکیشن سب سے بڑی ہوتی ہے، جو مائکرو بائیولوجیکل ریسرچ کے لیے سب سے اہم ہے۔ شیشے کی سلائیڈ اور لینس کے درمیان وسرجن کا تیل شامل کرنے کا بنیادی مقصد روشنی کی چمک کو بڑھانا اور مائکروسکوپ کی ریزولوشن کو بڑھانا ہے۔ روشنی کے اضطراب یا مکمل انعکاس کو کم کرنے اور مشاہدہ شدہ تصویر کو واضح کرنے کے لیے ہوا کے بجائے تیل کو روشنی کی ترسیل کے ذریعے استعمال کیا جاتا ہے۔
2. تجرباتی سامان
1. کالونیاں:
Escherichia coli 24h غذائی اجزاء آگر سلنٹ کلچر،
Staphylococcus aureus تقریباً 24h غذائی اجزا کی ترچھی ثقافت، Bacillus subtilis 12-18h نیوٹرینٹ ایگر سلانٹ کلچر۔
2. حل یا ری ایجنٹس:
آست پانی، آئوڈین محلول، کرسٹل وایلیٹ سٹیننگ سلوشن، 95 فیصد الکحل، سیفرانین سٹیننگ سلوشن، دیودار کا تیل۔ 3. آلہ:
خوردبین، شیشے کی سلائیڈ، انوکولیشن لوپ، الکحل لیمپ، چمٹی، لینس ٹشو۔
3. تجرباتی مراحل
a:
1. سمیر
سلائیڈ کو باہر نکالیں، سلائیڈ کو اگنیٹ کریں، سلائیڈ پر موجود الکحل کو جلا دیں اور اسے جراثیم سے پاک کریں، درمیان میں ڈسٹل واٹر کا ایک چھوٹا قطرہ ڈالیں، ٹیسٹ کے سلنٹ میڈیم پر تھوڑی مقدار میں بیکٹیریا کو آہستہ سے چننے کے لیے انوکیشن لوپ کا استعمال کریں۔ ٹیوب، پورے عمل کے دوران، ٹیسٹ ٹیوب کا منہ الکحل کے لیمپ کے اوپر ہونا چاہیے، اور کلچر میڈیم کی آلودگی کو روکنے کے لیے رفتار تیز ہونی چاہیے۔ پھر شیشے کی سلائیڈ پر پانی کی چھوٹی بوندوں کو سرکلر موشن میں لگائیں، پانی کی بوندوں کے ابر آلود ہونے پر رک جائیں، اور ان کے خشک ہونے اور ٹھیک ہونے کا انتظار کریں۔
2. پرائمری ڈائینگ
کالونی پر کرسٹل وایلیٹ (صرف بیکٹیریل فلم کو ڈھانپنا مناسب ہے) گرائیں، 1-2 منٹ تک داغ لگائیں، داغدار محلول کو انڈیل دیں، اور سلائیڈ کے اوپر سے باریک پانی سے اس وقت تک دھوئیں جب تک کہ ایلویٹ بے رنگ نہ ہو جائے، اور داغ کو سلائیڈ پر رکھیں۔ سلائسوں پر پانی کو ہلائیں۔
3. مورڈنٹ
بقایا پانی کو دھونے کے لیے ڈراپ وائز میں آیوڈین کا محلول شامل کریں، تقریباً 1 منٹ کے لیے ڈھانپیں، اور پانی سے دھو لیں۔
4. رنگ کاری
شیشے کی سلائیڈ پر پانی کو ہلائیں، شیشے کی سلائیڈ کو جھکائیں، اور سفید پس منظر کے نیچے اسے رنگین کرنے کے لیے 95 فیصد الکحل شامل کریں، جب تک کہ باہر نکلنے والا الکحل نیلا نظر نہ آئے، فوری طور پر الکحل کو پانی سے دھولیں، اور شیک سلائیڈ کو رکھیں۔ سلائسوں پر پانی بند کریں.
5. مقابلہ کرنا
تقریباً 1-2 منٹ تک سیفرانین محلول کے ساتھ کاؤنٹر لگائیں، پانی سے دھو لیں، اور پھر جاذب کاغذ سے خشک کریں
6. خوردبینی امتحان:
کم میگنیفیکیشن لینس کے نیچے دیکھے جانے والے بیکٹیریل کالونی کو تلاش کریں (سلائیڈ کو حرکت دیتے رہیں، اگر آپ کو سرخ سایہ محسوس ہوتا ہے، تو فوراً رک جائیں، میگنیفیکیشن کو ایڈجسٹ کریں، اگر یہ کالونی نہیں ہے، تلاش کرنا جاری رکھیں)، لینس کا بیرل بلند کریں، اور پھر تیل کے آئینے پر جائیں۔ نمونے کے علاقے میں دیودار کے تیل کا ایک قطرہ شامل کریں، اور موٹے ایڈجسٹر کے ساتھ لینس کے بیرل کو احتیاط سے نیچے کریں تاکہ تیل کا لینس تیل میں ڈوب جائے اور تقریباً نمونہ کو چھو جائے۔ کنڈینسر کو سب سے اونچے مقام پر اٹھائیں اور یپرچر کو پوری طرح کھولیں، لینس بیرل کو آہستہ آہستہ اوپر کرنے کے لیے موٹے ایڈجسٹر کا استعمال کریں جب تک کہ منظر کے میدان میں آبجیکٹ کی تصویر ظاہر نہ ہو اور اسے واضح اور فوکس کرنے کے لیے فائن ایڈجسٹر کا استعمال کریں۔
