فلوروسینس مائکروسکوپی کنفوکل لیزر مائکروسکوپی سے کس طرح مختلف ہے۔
فلوروسینس خوردبین
1. فلوروسینس مائیکروسکوپ الٹرا وائلٹ روشنی کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتی ہے تاکہ اس چیز کو روشن کیا جا سکے جس کا معائنہ کیا جا رہا ہے تاکہ یہ فلوروسینس خارج کر سکے، اور پھر خوردبین کے نیچے آبجیکٹ کی شکل اور مقام کا مشاہدہ کریں۔ فلوروسینس مائکروسکوپی کا استعمال خلیوں کے اندر مادوں کے جذب اور نقل و حمل کے ساتھ ساتھ کیمیائی مادوں کی تقسیم اور پوزیشننگ کا مطالعہ کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ خلیات میں کچھ مادے، جیسے کہ کلوروفیل، الٹرا وائلٹ شعاعوں سے شعاع ہونے کے بعد فلوریسس ہو سکتے ہیں۔ کچھ مادے خود فلوروسینٹ نہیں ہوسکتے ہیں، لیکن اگر وہ فلوروسینٹ رنگوں یا فلوروسینٹ اینٹی باڈیز سے داغے ہوئے ہیں، تو وہ بالائے بنفشی شعاعوں کے ساتھ شعاع ریزی کے بعد فلوروسینٹ کرسکتے ہیں۔ فلوروسینس مائیکروسکوپی ایسے مادوں پر معیار اور مقداری تحقیق کے آلات میں سے ایک ہے۔
2. فلوروسینس مائکروسکوپ کا اصول:
(الف) روشنی کا منبع: روشنی کا منبع مختلف طول موجوں کی روشنی (بالائے بنفشی سے اورکت تک) پھیلاتا ہے۔
(B) اتیجیت فلٹر روشنی کا ذریعہ: ایک مخصوص طول موج کی روشنی کو منتقل کرتا ہے جو نمونہ کو فلوروسیس کرنے کا سبب بن سکتا ہے، جبکہ روشنی کو روکتا ہے جو فلوروسینس کو متحرک کرنے کے لیے بیکار ہے۔
(C) فلوروسینٹ نمونے: عام طور پر فلوروسینٹ روغن سے داغے ہوتے ہیں۔
(D) بلاک کرنے والا فلٹر: جوش کی روشنی کو روکتا ہے جو نمونہ کے ذریعے جذب نہیں ہوتا ہے اور منتخب طور پر فلوروسینس منتقل کرتا ہے۔ فلوروسینس میں کچھ طول موجیں بھی منتخب طور پر منتقل ہوتی ہیں۔ ایک خوردبین جو بالائے بنفشی روشنی کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتی ہے تاکہ روشن آبجیکٹ کو فلوریسس بنا سکے۔ الیکٹران خوردبین کو پہلی بار 1931 میں برلن، جرمنی میں نار اور ہالوسکا نے جمع کیا تھا۔ یہ خوردبین روشنی کی شہتیر کی بجائے تیز رفتار الیکٹران بیم کا استعمال کرتی ہے۔ چونکہ الیکٹران کے بہاؤ کی طول موج روشنی کی نسبت بہت کم ہے، اس لیے الیکٹران خوردبین کی میگنیفیکیشن 800،000 بار تک پہنچ سکتی ہے، اور کم از کم ریزولوشن کی حد 0.2 نینو میٹر ہے۔ اسکیننگ الیکٹران مائکروسکوپ، جو 1963 میں استعمال ہونے لگی تھی، لوگوں کو اشیاء کی سطح پر چھوٹے ڈھانچے کو دیکھنے کی اجازت دیتی ہے۔
3. درخواست کا دائرہ: چھوٹی اشیاء کی تصاویر کو بڑا کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ عام طور پر حیاتیات، طب، خوردبینی ذرات وغیرہ کے مشاہدے میں استعمال ہوتا ہے۔
confocal خوردبین
1. کنفوکل مائیکروسکوپ منعکس روشنی کے آپٹیکل راستے میں ایک نیم عکاس نیم لینس کا اضافہ کرتا ہے، جو منعکس روشنی کو ریفریکٹ کرتا ہے جو لینس سے دوسری سمتوں میں گزری ہے۔ اس کے فوکس میں ایک پن ہول کے ساتھ ایک چکرا ہے، اور پن ہول فوکل پوائنٹ پر واقع ہے، بافل کے پیچھے، ایک فوٹو ملٹیپلائر ٹیوب ہے۔ یہ تصور کیا جا سکتا ہے کہ پتہ لگانے والی روشنی کے فوکس سے پہلے اور بعد میں منعکس ہونے والی روشنی اس کنفوکال سسٹم سے گزرتی ہے اور اسے چھوٹے سوراخ پر مرکوز نہیں کیا جا سکتا، اور اسے چکرا کر بلاک کر دیا جائے گا۔ تو فوٹو میٹر جو پیمائش کرتا ہے وہ فوکس پر منعکس روشنی کی شدت ہے۔
2. اصول: روایتی نظری خوردبینیں فیلڈ لائٹ ذرائع کا استعمال کرتی ہیں، اور نمونے پر ہر نقطہ کی تصویر کو ملحقہ پوائنٹس سے پھیلنے یا بکھری ہوئی روشنی سے مداخلت کی جائے گی۔ لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپس نمونے کے اندرونی حصے کو روشن کرنے کے لیے روشن پن ہولز کے ذریعے نقطہ روشنی کے ذرائع بنانے کے لیے لیزر بیم کا استعمال کرتی ہیں۔ فوکل ہوائی جہاز کے ہر پوائنٹ کو اسکین کیا جاتا ہے، اور نمونے پر روشن پوائنٹ کو پتہ لگانے والے پن ہول پر امیج کیا جاتا ہے، جو پتہ لگانے کے پیچھے فوٹو ملٹیپلائر ٹیوب (PMT) یا کولڈ کپلنگ ڈیوائس (cCCD) کے ذریعے پوائنٹ بائے پوائنٹ یا لائن بائے لائن موصول ہوتا ہے۔ pinhole، اور تیزی سے کمپیوٹر مانیٹر اسکرین پر فلوروسینٹ امیج بنتا ہے۔ الیومینیشن پن ہول اور ڈٹیکشن پن ہول معروضی لینس فوکل ہوائی جہاز کی نسبت جوڑ کر ہیں۔ فوکل ہوائی جہاز پر پوائنٹس ایک ہی وقت میں الیومینیشن پن ہول اور ایمیشن پن ہول پر مرکوز ہیں۔ فوکل ہوائی جہاز کے باہر کے پوائنٹس کا پتہ لگانے والے پن ہول پر امیج نہیں کیا جائے گا۔ یہ حاصل کیا گیا ہے کنفوکل امیجز نمونوں کے آپٹیکل کراس سیکشنز ہیں، جو عام خوردبینوں میں دھندلی امیجز کی کوتاہیوں پر قابو پاتے ہیں۔
3. درخواست کے شعبے: طب، حیوانی اور پودوں کی سائنسی تحقیق، بائیو کیمسٹری، بیکٹیریاولوجی، سیل بائیولوجی، ٹشو ایمبریالوجی، فوڈ سائنس، جینیٹکس، فارماکولوجی، فزیالوجی، آپٹکس، پیتھالوجی، باٹنی، نیورو سائنس، میرین بائیولوجی، اور میٹریل سائنس، الیکٹرانک سائنس۔ ، میکانکس، پیٹرولیم ارضیات، معدنیات۔
