ملٹی فوٹون لیزر اسکیننگ مائکروسکوپی کے فوائد کو بڑھانا
لیزر سکیننگ ملٹی فوٹون مائیکروسکوپی آپٹیکل مائکروسکوپی کے مقابلے میں ایک بڑی بہتری ہے۔ یہ زندہ خلیات، فکسڈ سیلز اور ٹشوز کی گہری ساخت کا مشاہدہ کر سکتا ہے، اور واضح اور تیز ملٹی لیئر زیڈ پلین سٹرکچر حاصل کر سکتا ہے، یعنی آپٹیکل سیکشنز، جن سے یہ نمونہ کی تین جہتی ٹھوس ساخت بنا سکتا ہے۔ کنفوکل مائیکروسکوپی ایک لیزر لائٹ سورس کا استعمال کرتی ہے جو توسیع کے بعد معروضی لینس کے پورے پچھلے فوکل جہاز کو بھرتی ہے، اور پھر معروضی لینس کے لینس سسٹم سے گزر کر نمونے کے فوکل طیارے پر ایک بہت ہی چھوٹے پوائنٹ میں بدل جاتی ہے۔ معروضی لینس کے عددی یپرچر پر منحصر ہے، روشن ترین روشنی کے مقام کا قطر تقریباً 0.25 ~ 0.8μm ہے، اور گہرائی تقریباً 0.5 ~ 1.5μm ہے . کنفوکل اسپاٹ کا سائز مائکروسکوپ کے ڈیزائن، لیزر ویو لینتھ، معروضی لینس کی خصوصیات، اسکیننگ یونٹ کی حیثیت کی ترتیبات اور نمونہ کی خصوصیات پر منحصر ہے۔ فیلڈ مائیکروسکوپ کی روشنی کی حد اور گہرائی بڑی ہوتی ہے، جبکہ کنفوکل مائکروسکوپ کی روشنی فوکل ہوائی جہاز پر عین توجہ پر مرکوز ہوتی ہے۔ کنفوکل مائیکروسکوپی کا سب سے بنیادی فائدہ یہ ہے کہ یہ موٹے فلوروسینٹ نمونوں (جو 50 μm یا اس سے زیادہ تک پہنچ سکتے ہیں) کی ٹھیک آپٹیکل سیکشننگ کر سکتی ہے، اور سلائسوں کی موٹائی تقریباً 0.5 سے 1.5 μm ہوتی ہے۔ سیریل آپٹیکل سیکشن کی تصاویر کو ایک نفیس مائکروسکوپ Z-axis سٹیپر موٹر کا استعمال کرتے ہوئے نمونے کو اوپر اور نیچے لے جا کر حاصل کیا جا سکتا ہے۔ تصویری معلومات کا مجموعہ نمونے پر دیگر مقامات سے خارج ہونے والے سگنلز کی مداخلت کے بغیر ایک عین طیارے میں کنٹرول کیا جاتا ہے۔ بیک گراؤنڈ فلوروسینس کے اثر و رسوخ کو ہٹانے اور سگنل ٹو شور کے تناسب میں اضافہ کرنے کے بعد، روایتی فیلڈ ایلومینیٹڈ فلوروسینس امیجز کے مقابلے میں کنفوکل امیجز کے کنٹراسٹ اور ریزولوشن میں نمایاں بہتری آئی ہے۔ بہت سے نمونوں میں، پیچیدہ نظام بنانے کے لیے بہت سے پیچیدہ ساختی اجزاء آپس میں جڑے ہوتے ہیں، لیکن ایک بار جب کافی آپٹیکل حصوں کو اکٹھا کر لیا جائے، تو ہم سافٹ ویئر کے ذریعے انہیں تین جہتوں میں دوبارہ تشکیل دے سکتے ہیں۔ یہ تجرباتی طریقہ حیاتیاتی تحقیق میں خلیات یا بافتوں کے درمیان پیچیدہ ساختی اور فعال تعلقات کو واضح کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے۔
