فلوروسینس ٹوٹل انٹرنل ریفلیکشن فلوروسینس مائیکروسکوپی کا اطلاق
TIRFM (ٹوٹل انٹرنل ریفلیکشن فلوروسینس مائیکروسکوپ)، کل اندرونی ریفلیکشن فلوروسینس مائکروسکوپ، جب روشنی کسی میڈیم سے کم ریفریکٹیو انڈیکس والے میڈیم میں داخل ہوتی ہے جس میں ہائی ریفریکٹیو انڈیکس ہوتا ہے، اگر واقعہ کا زاویہ کافی بڑا ہو، تمام روشنی بغیر اضطراب کے منعکس ہوتی ہے۔ لیکن دو ذرائع ابلاغ کے انٹرفیس میں مبہم لہریں پیدا ہوتی ہیں جو 100nm کے اندر اندر مائدیپتی کو متحرک کر سکتی ہیں تاکہ آبجیکٹ کی سطح کے مشاہدے کو محسوس کیا جا سکے۔ حوصلہ افزائی کی روشنی کو روایتی فلوروسینس مائکروسکوپ یا ایک خاص الیومینیٹر کے ذریعے بھیجا جا سکتا ہے، اور لیزر کے واقعے کے زاویے کو کنٹرول کیا جا سکتا ہے۔ اتیجیت روشنی کو ڈیٹیکٹر میں داخل ہونے سے روکنے کے لیے فوری فیلڈ ایکسائٹیشن کا طریقہ استعمال کیا جاتا ہے۔ شیشے اور پانی کے درمیان انٹرفیس پر جوش کی روشنی عکاسی کے ذریعہ ایک مکمل داخلی پیدا کرتی ہے۔ اتیجیت روشنی کی کفایتی کشندگی کی وجہ سے، صرف نمونہ کا علاقہ کل عکاسی کی سطح کے بالکل قریب ہی فلوروسینس ریفلیکشن پیدا کرے گا، جو مشاہدے کے ہدف میں پس منظر کی روشنی کے شور کی مداخلت کو بہت حد تک کم کرتا ہے، اس لیے یہ ٹیکنالوجی متحرک مشاہدے میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتی ہے۔ سیل کی سطح کے مادوں کا۔
کل اندرونی عکاسی فلوروسینس مائکروسکوپی (TIRFM) کا اسکیمیٹک خاکہ
①نمونہ ②Evanescent لہر کی حد ③کور گلاس ④تیل وسرجن ⑤ہدف ⑥اخراج بیم (سگنل) ⑦حوصلہ افزائی بیم
مکمل اندرونی عکاسی حاصل کرنے کے لیے، ایک بڑے واقعے کے زاویے کی ضرورت ہوتی ہے، مثال کے طور پر، شیشے کے پانی کے انٹرفیس پر واقعے کا زاویہ 61 ڈگری سے زیادہ ہے۔ یہ ایک پرزم کے ذریعے حاصل کیا جا سکتا ہے، جسے پرزم پر مبنی TIRFM کہا جاتا ہے، یا ایک اعلی عددی یپرچر والے آبجیکٹیو لینس کے ذریعے، جسے آبجیکٹیو ٹائپ TIRFM کہا جاتا ہے۔ موجودہ کمرشلائزڈ کل اندرونی عکاسی فلوروسینس خوردبینیں عام طور پر معروضی لینس کی قسم کی ہوتی ہیں، جس میں تیز رفتاری اور اعلیٰ درستگی ہوتی ہے۔
کل اندرونی عکاسی فلوروسینس مائکروسکوپی کچھ حیاتیاتی شعبوں میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتی ہے کیونکہ یہ اشیاء کی سطح پر بہت ہی پتلی رینج (100nm سے کم) میں فلوروسینس مشاہدے کا احساس کر سکتی ہے۔ جیسے کہ درج ذیل ایپلی کیشنز:
سیل کی سطح کی تصاویر کا مشاہدہ: سیل جھلی کی سطح کی ساخت، سیل کی سطح کا رابطہ، جھلی کی سطح کی حرکیات/پروٹین لوکلائزیشن۔
سنگل مالیکیول مشاہدہ اور ہیرا پھیری: myosin، actin، اور Cy3-لیبل لگا ہوا ATP۔
خلیے کی جھلی کی سطح کی حرکت: جیسے vesicle engulfment، vesicle exhalation، اور vesicle exocrine. دی
سیل جھلی میں کیلشیم اسپارکنگ کے رجحان کا مشاہدہ، آئن چینل کی نگرانی۔
مالیکیولر موٹر ریسرچ: گھومنے والی موٹریں، سائٹوسکیلیٹل پروٹین، پولیمر، جی پروٹین، رنگ پروٹین، نیوکلیوٹائڈ موٹرز۔
حیاتیات کے میدان کے علاوہ، اس میں کیمیکل مالیکیولر ڈھانچے کے مشاہدے کے لیے کیمسٹری کے شعبے میں بھی اچھی ایپلی کیشنز موجود ہیں۔
