کنفوکل فلوروسینس مائکروسکوپی کا بنیادی ڈھانچہ
(1) اسکیننگ ماڈیول
اسکیننگ ماڈیول بنیادی طور پر ایک پنہول لائٹ بار (آپٹیکل سلائسز کی موٹائی کو کنٹرول کرنے)، ایک سپیکٹروسکوپ (طول موج کے مطابق روشنی کے پھیلاؤ کی سمت کو تبدیل کرنا)، ایک اخراج فلوروسینس رنگین میٹر (پتہ لگانے کے لیے ایک مخصوص طول موج کی حد کے اندر روشنی کا انتخاب)، اور پر مشتمل ہوتا ہے۔ ایک پکڑنے والا (فوٹو ملٹیپلیر ٹیوب)۔ فلوروسینٹ نمونے میں ملا ہوا فلوروسینس سکینر میں داخل ہوتا ہے، اور پتہ لگانے کے پنہول لائٹ بار، سپیکٹرو میٹر، اور کلر میٹر کے ذریعے منتخب کیے جانے کے بعد، اسے مختلف مونوکرومیٹک فلوروسینس میں تقسیم کیا جاتا ہے، جو مختلف فلوروسینس چینلز میں پائے جاتے ہیں اور متعلقہ کنفوکل امیجز بناتے ہیں۔ ایک ہی وقت میں، کئی متوازی یک رنگی فلوروسینس امیجز اور ان کی کمپوزٹ امیجز کو کمپیوٹر اسکرین پر دکھایا جا سکتا ہے۔
(2) فلوروسینس مائکروسکوپی سسٹم
مائکروسکوپ LSCM کا بنیادی جزو ہے، جس کا تعلق نظام کی امیجنگ کوالٹی سے ہے۔ مائکروسکوپ آپٹیکل پاتھ کو آسانی سے امیجنگ کے معیار اور پیمائش کی درستگی کو متاثر کیے بغیر آپٹیکل اختیارات کے ساتھ لامحدود دور آپٹیکل سسٹم میں داخل کیا جا سکتا ہے۔ مقصد ایک بڑا عددی یپرچر فلیٹ فیلڈ اپوکرومیٹک مقصد ہونا چاہئے، جو فلوروسینس کے حصول اور واضح امیجنگ کے لیے فائدہ مند ہے۔ معروضی لینس گروپ کی تبدیلی، کلر فلٹر گروپ کا انتخاب، اسٹیج کی موومنٹ ایڈجسٹمنٹ، اور فوکل ہوائی جہاز کی میموری لاکنگ سبھی کو کمپیوٹر کے ذریعے خود بخود کنٹرول کیا جانا چاہیے۔
لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپی میں استعمال ہونے والی فلوروسینس مائکروسکوپ عام طور پر روایتی فلوروسینس مائیکروسکوپ جیسی ہی ہوتی ہے، لیکن اس کی اپنی خصوصیات ہیں: اسے اسکینر سے منسلک کرنے کی ضرورت ہے، تاکہ لیزر خوردبین کے مقصد میں داخل ہو کر نمونے کو روشن کر سکے۔ نمونے سے خارج ہونے والا فلوروسینس پکڑنے والے تک پہنچ جاتا ہے۔ ایک لائٹ پاتھ کنورژن ڈیوائس کی ضرورت ہے، جو مرکری لیمپ کو لیزرز میں تبدیل کرتا ہے، اور مرکری لیمپ کی روشنی کی شدت کو ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔
(3) عام لیزرز
لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپی میں استعمال ہونے والے لیزر ذرائع میں سنگل لیزر اور ملٹی لیزر سسٹم شامل ہیں، اور عام طور پر استعمال ہونے والے لیزر میں درج ذیل تین اقسام شامل ہیں:
سیمی کنڈکٹر لیزر: 405nm (بالائے بنفشی سپیکٹرل لائن کے قریب)
آرگن آئن لیزر: 457nm، 477nm، 488nm، 514nm (نیلی سبز روشنی)
He-Ne لیزر: 543nm (گرین لائٹ He-Ne green laser) 633nm (ریڈ لائٹ He-Ne ریڈ لیزر)
یووی لیزر (یووی لیزر): 351 این ایم، 364 این ایم (یو وی لائٹ)
(4) معاون سامان
ایئر کولڈ، واٹر کولڈ کولنگ سسٹم اور ریگولیٹڈ پاور سپلائیز۔
لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپ کا بنیادی کام کرنے کا اصول یہ ہے کہ پہلے لیزر سے ایک مخصوص طول موج کی اتیجیت روشنی خارج کی جائے۔ امپلیفیکیشن کے بعد، روشنی اسکینر میں روشن پن ہول لائٹ بار سے گزر کر ایک نقطہ روشنی کا ذریعہ بنتی ہے۔ معروضی لینس نمونے کے فوکل ہوائی جہاز پر فوکس کرتا ہے، اور نمونے پر متعلقہ روشن پوائنٹس پرجوش ہوتے ہیں اور فلوروسینس خارج کرتے ہیں۔ ڈیٹیکشن ہول لائٹ بار سے گزرنے کے بعد، یہ ڈیٹیکٹر تک پہنچتا ہے اور کمپیوٹر مانیٹرنگ اسکرین پر اس کی تصویر کشی کی جاتی ہے۔ اس طرح، فوکل ہوائی جہاز پر نمونے کے ہر نقطہ کی فلوروسینس امیجز سے ایک مکمل کنفوکل امیج بنتی ہے، جسے ہلکا ٹکڑا کہا جاتا ہے۔
