فلوروسینس مائکروسکوپ اور عام خوردبین کے درمیان فرق
میں نے حال ہی میں چوہوں کے کچھ منجمد حصے بنانے کی کوشش کی۔ اگلا، میں یہ دیکھنے کے لیے فلوروسینس مائیکروسکوپ استعمال کروں گا کہ آیا میں نے جو وائرس لگایا ہے وہ دماغ کے اس حصے میں ہے جو میں چاہتا ہوں۔ فلوروسینس مائیکروسکوپی کے کچھ بنیادی اصولوں کو مختصراً سیکھنے کی ضرورت ہے، اور میں انہیں یہاں شیئر کروں گا۔
فلوروسینس خوردبین الٹرا وائلٹ روشنی کو روشنی کے ذریعہ کے طور پر استعمال کرتے ہیں تاکہ معائنہ کی جا رہی چیز کو روشن کیا جاسکے، جس کی وجہ سے شے روشنی خارج کرتی ہے، اور پھر خوردبین کے نیچے آبجیکٹ کا مشاہدہ کرتی ہے۔ یہ بنیادی طور پر امیونو فلوروسینس خلیوں کے لئے استعمال ہوتا ہے۔ یہ بنیادی طور پر روشنی کا ذریعہ، ایک فلٹر پلیٹ سسٹم اور ایک نظری نظام پر مشتمل ہے۔ نمونے کی فلوروسینٹ امیج کا مشاہدہ آئی پیس اور معروضی لینس کی میگنیفیکیشن کے ذریعے کیا جاتا ہے۔ آئیے فلوروسینس مائکروسکوپ اور ایک عام آپٹیکل مائکروسکوپ کے درمیان فرق پر ایک نظر ڈالیں۔
1. روشنی کا طریقہ دیکھیں
فلوروسینس مائیکروسکوپ کا الیومینیشن طریقہ عام طور پر ایپی الیومینیشن ہے، جس کا مطلب ہے کہ روشنی کا منبع معروضی لینس کے ذریعے ٹیسٹ کے نمونے پر رکھا جاتا ہے۔
2. قرارداد کو دیکھیں
فلوروسینس خوردبین الٹرا وائلٹ روشنی کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتی ہے، جس کی طول موج کم ہوتی ہے لیکن عام نظری خوردبین سے زیادہ ریزولوشن ہوتی ہے۔
3. فلٹرز میں فرق
فلوروسینس خوردبین دو خاص فلٹرز کا استعمال کرتی ہیں، ایک روشنی کے منبع کے سامنے نظر آنے والی روشنی کو فلٹر کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، اور ایک الٹرا وائلٹ شعاعوں کو فلٹر کرنے کے لیے معروضی لینس اور آئی پیس کے درمیان استعمال کیا جاتا ہے، جو انسانی آنکھوں کی حفاظت کر سکتی ہے۔
فلوروسینس خوردبین بھی نظری خوردبین کی ایک قسم ہے۔ اس کی بنیادی وجہ یہ ہے کہ فلوروسینس مائیکروسکوپ کے ذریعے پرجوش طول موج کم ہوتی ہے، اس لیے یہ فلوروسینس مائکروسکوپ اور عام خوردبین کے درمیان ساخت اور استعمال میں فرق کا باعث بنتی ہے۔ زیادہ تر فلوروسینس خوردبینوں میں کمزور روشنی کو پکڑنے کا اچھا کام ہوتا ہے۔ ، لہذا اس کی امیجنگ کی صلاحیت انتہائی کمزور فلوروسینس کے تحت بھی اچھی ہے۔ حالیہ برسوں میں فلوروسینس مائکروسکوپ کی مسلسل بہتری کے ساتھ، شور بھی بہت کم ہو گیا ہے۔ لہذا، زیادہ سے زیادہ فلوروسینس خوردبین کا استعمال کیا جا رہا ہے.
دو فوٹون فلوروسینس مائکروسکوپی کے بارے میں علم
دو فوٹوون کی حوصلہ افزائی کا بنیادی اصول یہ ہے: اعلی فوٹوون کثافت کی حالت میں، فلوروسینٹ مالیکیولز ایک ہی وقت میں دو طویل طول موج کے فوٹون جذب کر سکتے ہیں، اور ایک مختصر نام نہاد پرجوش ریاست کی زندگی کے بعد، ایک چھوٹی طول موج کے ساتھ ایک فوٹون خارج کرتے ہیں۔ . ;اثر وہی ہے جو فلوروسینٹ مالیکیولز کو اکسانے کے لیے طول موج کے نصف لمبی طول موج کے ساتھ فوٹوون کا استعمال کرتا ہے۔ دو فوٹوون اتیجیت کے لیے اعلی فوٹوون کثافت کی ضرورت ہوتی ہے۔ خلیات کو نقصان نہ پہنچانے کے لیے، دو فوٹوون خوردبینیں ہائی انرجی موڈ لاکڈ پلس لیزر استعمال کرتی ہیں۔ یہ لیزر اعلی چوٹی کی توانائی اور کم اوسط توانائی کے ساتھ لیزر روشنی خارج کرتا ہے، جس کی پلس چوڑائی صرف 100 فیمٹو سیکنڈز اور فریکوئنسی 80 سے 100 میگا ہرٹز ہے۔ پلسڈ لیزر کے فوٹان کو فوکس کرنے کے لیے اعلی عددی اپرچر آبجیکٹیو لینس کا استعمال کرتے وقت، آبجیکٹیو لینس کے فوکس میں فوٹوون کی کثافت سب سے زیادہ ہوتی ہے۔ دو فوٹوون کا جوش صرف معروضی لینس کے فوکس پر ہوتا ہے، اس لیے دو فوٹوون مائکروسکوپ کو کنفوکل پن ہول کی ضرورت نہیں ہوتی، جو فلوروسینس کا پتہ لگانے کی کارکردگی کو بہتر بناتا ہے۔
عام فلوروسینس رجحان میں، جوش کی روشنی کی کم فوٹوون کثافت کی وجہ سے، ایک فلوروسینٹ مالیکیول ایک ہی وقت میں صرف ایک فوٹون کو جذب کر سکتا ہے اور پھر ریڈی ایٹیو ٹرانزیشن کے ذریعے ایک فلوروسینس فوٹون خارج کر سکتا ہے۔ یہ سنگل فوٹون فلوروسینس ہے۔ لیزر کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتے ہوئے فلوروسینس اتیجیت کے عمل کے لیے، دو فوٹوون یا یہاں تک کہ ملٹی فوٹون فلوروسینس مظاہر ہو سکتا ہے۔ اس صورت میں، استعمال کیے جانے والے اتیجیت روشنی کے ماخذ کی شدت زیادہ ہے، اور فوٹوون کی کثافت فلوروسینٹ مالیکیولز کی ایک ہی وقت میں دو فوٹون جذب کرنے کی ضرورت کو پورا کرتی ہے۔ عام لیزرز کو اتیجیت روشنی کے ذرائع کے طور پر استعمال کرنے کے عمل میں، فوٹوون کی کثافت اب بھی دو فوٹوون جذب پیدا کرنے کے لیے کافی نہیں ہے۔ فیمٹوسیکنڈ پلس لیزر عام طور پر استعمال ہوتے ہیں، اور ان کی فوری طاقت میگا واٹ کی سطح تک پہنچ سکتی ہے۔ لہذا، دو فوٹون فلوروسینس کی طول موج اتیجیت روشنی کی طول موج سے کم ہے، جو نصف اتیجیت طول موج کے اتیجیت سے پیدا ہونے والے اثر کے برابر ہے۔
