فلوروسینس مائکروسکوپ اور لیزر کنفوکل مائکروسکوپ کے درمیان فرق
فلوروسینٹ خوردبین
1. فلوروسینس مائیکروسکوپ الٹرا وائلٹ روشنی کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتی ہے، جس کا استعمال دریافت شدہ شے کو روشن کرنے کے لیے کیا جاتا ہے تاکہ اس سے فلوروسینس خارج ہو، اور پھر خوردبین کے نیچے آبجیکٹ کی شکل اور پوزیشن کا مشاہدہ کیا جا سکے۔ فلوروسینس مائکروسکوپ کا استعمال خلیوں میں کیمیائی مادوں کے جذب، نقل و حمل، تقسیم اور مقام کا مطالعہ کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ خلیات میں کچھ مادے، جیسے کہ کلوروفیل، الٹرا وائلٹ شعاعوں سے شعاع ہونے کے بعد فلوریسس ہو سکتے ہیں۔ دیگر مادے خود بخود فلوریس نہیں ہوسکتے ہیں، لیکن وہ فلوروسینٹ رنگوں یا فلوروسینٹ اینٹی باڈیز سے رنگے جانے اور الٹرا وائلٹ شعاعوں سے شعاع ریزی کے بعد فلوریسس ہوسکتے ہیں۔ فلوروسینس خوردبین ان مادوں پر معیاری اور مقداری تحقیق کے لیے ایک ٹول ہے۔
2، فلوروسینس خوردبین اصول:
(a) روشنی کا منبع: روشنی کا منبع مختلف طول موج (الٹرا وائلٹ سے لے کر انفراریڈ تک) کی روشنی کو پھیلاتا ہے۔
(b) ایکسائٹیشن فلٹر لائٹ سورس: ایک مخصوص طول موج کے ساتھ روشنی کو منتقل کرنا جو نمونہ فلوروسیس بنا سکتا ہے، جبکہ روشنی کو روکتا ہے جو ایکسائٹیشن فلوروسینس کے لیے بیکار ہے۔
(c) فلوروسینٹ نمونے: عام طور پر فلوروسینٹ روغن سے داغے ہوتے ہیں۔
(d) بلاکنگ فلٹر: مائدیپتی کو منتخب طور پر منتقل کرنے کے لیے نمونے کے ذریعے جذب نہ ہونے والی اتیجیت روشنی کو مسدود کرنا، اور فلوروسینس میں کچھ طول موجیں بھی منتخب طور پر منتقل ہوتی ہیں۔ ایک خوردبین جو بالائے بنفشی روشنی کو روشنی کے منبع کے طور پر استعمال کرتی ہے تاکہ شعاع زدہ شے کو فلوروسینس خارج کر سکے۔ الیکٹران خوردبین کو پہلی بار 1931 میں برلن میں Knohl اور Ha Roska نے جمع کیا تھا۔ یہ خوردبین روشنی کی شعاع کی بجائے تیز رفتار الیکٹران بیم کا استعمال کرتی ہے۔ چونکہ الیکٹران کے بہاؤ کی طول موج روشنی کی لہر سے بہت کم ہے، اس لیے الیکٹران خوردبین کی میگنیفیکیشن 800 ہزار گنا تک پہنچ سکتی ہے، اور کم از کم ریزولوشن کی حد 0.2 نینو میٹر ہے۔ اسکیننگ الیکٹران مائکروسکوپ، جس کا استعمال 1963 میں شروع ہوا، لوگوں کو اشیاء کی سطح پر چھوٹے ڈھانچے کو دیکھ سکتا ہے۔
3. اطلاق کا دائرہ: چھوٹی چیزوں کی تصویر کو بڑا کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ یہ عام طور پر حیاتیات، طب اور خوردبینی ذرات کے مشاہدے پر لاگو ہوتا ہے۔
کنفوکل مائکروسکوپ
1. کنفوکل مائیکروسکوپ منعکس روشنی کے نظری راستے پر ایک نیم عکاس نیم لینس کا اضافہ کرتا ہے، جو منعکس روشنی کو ریفریکٹ کرتا ہے جو لینس سے دوسری سمتوں میں گزری ہے۔ اس کے فوکس پر، پن ہول کے ساتھ ایک چکرا ہے، اور پن ہول فوکس پر واقع ہے۔ چکرانے کے پیچھے ایک فوٹو ملٹی پلیئر ٹیوب ہے۔ یہ تصور کیا جا سکتا ہے کہ پتہ لگانے والی روشنی کے فوکس سے پہلے اور بعد میں منعکس ہونے والی روشنی اس کنفوکل سسٹم سے گزرتی ہے، اور چھوٹے سوراخ پر مرکوز نہیں ہوگی، بلکہ چکرا کر بلاک کر دی جائے گی۔ لہذا فوٹو میٹر فوکس پر منعکس روشنی کی شدت کی پیمائش کرتا ہے۔
2. اصول: روایتی آپٹیکل مائکروسکوپ فیلڈ لائٹ سورس کا استعمال کرتی ہے، اور نمونے پر موجود ہر نقطہ کی تصویر کو ملحقہ پوائنٹس کے پھیلاؤ یا بکھری ہوئی روشنی سے مداخلت کی جائے گی۔ لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپ الیومینیشن پن ہول سے گزرنے والے لیزر بیم کے ذریعہ بننے والے پوائنٹ لائٹ سورس کا استعمال کرکے نمونے میں فوکل طیارے کے ہر نقطہ کو اسکین کرتی ہے۔ نمونہ پر شعاع زدہ نقطہ کو پتہ لگانے والے پن ہول پر امیج کیا جاتا ہے، جو پن ہول کا پتہ لگانے کے بعد فوٹو ملٹی پلیئر ٹیوب (PMT) یا کولڈ کپلڈ ڈیوائس (cCCD) کے ذریعے پوائنٹ یا لائن بائے پوائنٹ موصول ہوتا ہے، اور ایک فلوروسینٹ امیج تیزی سے بن جاتی ہے۔ کمپیوٹر مانیٹر سکرین. الیومینیشن پن ہول اور ڈیٹیکشن پن ہول معروضی لینس کے فوکل ہول کے حوالے سے جوڑتے ہیں، اور فوکل ہوائی جہاز کے پوائنٹس ایک ہی وقت میں الیومینیشن پن ہول اور ایمیشن پن ہول پر فوکس کرتے ہیں، اور فوکل ہوائی جہاز کے باہر کے پوائنٹس نہیں ہوں گے۔ پتہ لگانے والے پن ہول پر تصویر بنائی جائے، تاکہ حاصل کی گئی کنفوکل تصویر نمونے کا آپٹیکل کراس سیکشن ہو، جو عام خوردبین کی دھندلی تصویر کی خرابی پر قابو پاتا ہے۔
3. درخواست کے شعبے: ادویات، جانوروں اور پودوں کی تحقیق، بائیو کیمسٹری، بیکٹیریاولوجی، سیل بائیولوجی، ٹشو اینڈ ایمبریو، فوڈ سائنس، جینیٹکس، فارماسولوجی، فزیالوجی، آپٹکس، پیتھالوجی، نباتیات، نیورو سائنس، میرین بائیولوجی، میٹریل سائنس، الیکٹرانک سائنس، مکینکس، پیٹرولیم ارضیات اور معدنیات۔
