فلوروسینس مائکروسکوپز اور عام آپٹیکل مائکروسکوپ کے مابین اختلافات اور خصوصیات
فلوروسینس مائکروسکوپ عام آپٹیکل مائکروسکوپ سے مختلف ہے جس میں یہ عام روشنی کے ذرائع کی روشنی کے تحت نمونوں کا مشاہدہ نہیں کرتا ہے۔ اس کے بجائے ، یہ مائکروسکوپ کے نیچے نمونہ کے اندر فلوروسینٹ مادوں کو حوصلہ افزائی کرنے کے لئے روشنی کی ایک خاص طول موج (عام طور پر الٹرا وایلیٹ لائٹ ، نیلے رنگ کی وایلیٹ لائٹ) کا استعمال کرتا ہے ، جس کی وجہ سے وہ فلوروسینس کو خارج کرتے ہیں۔ لہذا ، فلوروسینس مائکروسکوپ میں روشنی کے منبع کا کردار براہ راست روشنی نہیں ہے ، بلکہ نمونہ کے اندر فلوروسینٹ مادوں کو حوصلہ افزائی کرنے کے لئے ایک توانائی کے ذریعہ ہے۔ ہم نمونوں کا مشاہدہ کرنے کی وجہ روشنی کے منبع کی روشنی کی وجہ سے نہیں ہے ، لیکن فلوروسینس رجحان کو پرجوش روشنی کی توانائی کو جذب کرنے کے بعد نمونہ کے اندر فلوروسینٹ مادوں کی نمائش کی گئی ہے۔ اس سے ، یہ دیکھا جاسکتا ہے کہ فلوروسینس مائکروسکوپی کی خصوصیت بنیادی طور پر ہے کہ اس کا روشنی کا ذریعہ ایک خاص طول موج کی حد میں بڑی مقدار میں جوش و خروش کی روشنی فراہم کرسکتا ہے ، تاکہ نمونہ میں فلوروسینٹ مادے جوش و خروش کی روشنی کی ضروری شدت حاصل کرسکیں۔ ایک ہی وقت میں ، فلوروسینس مائکروسکوپ میں اسی طرح کے فلٹر سسٹمز لازمی ہیں۔ فلوروسینس مائکروسکوپ فلوروسینس ٹشو کیمسٹری کا ایک بنیادی ذریعہ ہے۔ یہ اہم اجزاء پر مشتمل ہے جیسے الٹرا - ہائی وولٹیج لائٹ ماخذ ، ایک فلٹر سسٹم (بشمول جوش و خروش اور دباؤ فلٹر پلیٹیں) ، ایک آپٹیکل سسٹم ، اور فوٹو گرافی کا نظام۔ یہ نمونہ کو مشتعل کرنے اور فلوروسینس کو خارج کرنے کے لئے ایک خاص طول موج کی روشنی کا استعمال کرتا ہے۔
1. فلوروسینس اتیجیت کے طریقے: روشنی کی طول موج کی حد کے مطابق ، دو اقسام ہیں: یووی جوش و خروش کا طریقہ (الٹرا وایلیٹ الیومینیشن کا استعمال کرتے ہوئے) اور بی وی جوش و خروش کا طریقہ (نیلے رنگ کی وایلیٹ لائٹ کا استعمال کرتے ہوئے)۔ UV جوش و خروش کا طریقہ الٹرا وایلیٹ لائٹ کے قریب 400nm سے کم استعمال کرتا ہے۔ اس طریقہ کار میں واضح جوش و خروش کی روشنی نہیں ہے ، لہذا مشاہدہ فلوروسینس رنگ کے موروثی فلوروسینس کو ظاہر کرتا ہے ، جس سے پس منظر کے ٹشو کے خود فلوروسینس سے نمونہ پر مخصوص فلوروسینس کو فرق کرنا آسان ہوجاتا ہے۔
2. بی وی جوش و خروش کا طریقہ: اس میں الٹرا وایلیٹ سے بلیو لائٹ تک جوش و خروش شامل ہے جس میں 404nm اور 434nm پر مرکز ہے۔ یہ طریقہ نمونہ کو ختم کرنے کے لئے نیلی روشنی کا استعمال کرتا ہے ، لہذا فلوروسینس آبزرویشن سسٹم کے فلٹر آف فلٹر کا کٹ {{4} off کو ایک فلٹر استعمال کرنا چاہئے جو نیلی روشنی کو مکمل طور پر روک سکتا ہے اور مطلوبہ سبز اور پیلے رنگ کے فلوروسینس سے مکمل طور پر گزر سکتا ہے۔ فلورسنٹ اینٹی باڈی کے طریقہ کار کے لئے استعمال ہونے والے فلورسنٹ روغن۔ حوصلہ افزائی کی روشنی کی زیادہ سے زیادہ جذب طول موج اور فلوروسینس کی زیادہ سے زیادہ اخراج طول موج نسبتا close قریب ہے ، لہذا BV جوش و خروش کے طریقہ کار میں استعمال ہونے والے فلٹر کو تیز کٹ فلٹر کا استعمال کرنا چاہئے۔ یہ طریقہ نیلی روشنی کو جوش و خروش کے طور پر استعمال کرسکتا ہے ، لہذا فلوروسینٹ روغنوں کی جذب کی کارکردگی زیادہ ہے ، اور روشن تصاویر حاصل کی جاسکتی ہیں۔ نقصان یہ ہے کہ 500nm سے نیچے فلوروسینس کو نہیں دیکھا جاسکتا ، جبکہ 500nm سے اوپر فلوروسینس پوری شبیہہ کو پیلے رنگ میں ظاہر کرتا ہے۔ فلوروسینٹ اینٹی باڈی کے طریقہ کار میں ، خاصیت زیادہ تر فلوروسینٹ روغنوں سے منفرد رنگ کے ذریعہ طے کی جاتی ہے ، لہذا جب ٹھیک ٹھیک خصوصیت پر گفتگو کرتے وقت ، مذکورہ بالا BV جوش و خروش کے طریقہ کار کی خرابیوں کا اکثر خاص اثر پڑتا ہے۔
