فلوروسینس مائکروسکوپی اور کنفوکل مائکروسکوپی کے مابین اختلافات
فلوروسینس مائکروسکوپ
1. فلوروسینس مائکروسکوپ الٹرا وایلیٹ لائٹ کو روشنی کے ذریعہ کے طور پر استعمال کرتا ہے تاکہ اس چیز کو معائنہ کیا جا. جس کی وجہ سے اس سے فلوروسینس کا اخراج ہوتا ہے ، اور پھر خوردبین کے تحت شے کی شکل اور پوزیشن کا مشاہدہ ہوتا ہے۔ فلوروسینس مائکروسکوپی کا استعمال خلیوں کے اندر موجود مادوں کی جذب ، نقل و حمل ، تقسیم ، اور لوکلائزیشن کا مطالعہ کرنے کے لئے کیا جاتا ہے۔ خلیوں میں کچھ مادے ، جیسے کلوروفیل ، جب الٹرا وایلیٹ تابکاری کے سامنے آتے ہیں تو وہ فلوریس کرسکتے ہیں۔ کچھ ایسے مادے بھی ہیں جو خود کو فلوروسینس کا اخراج نہیں کرسکتے ہیں ، لیکن اگر فلوروسینٹ رنگوں یا فلوروسینٹ اینٹی باڈیوں سے داغدار اور الٹرا وایلیٹ لائٹ سے غیر منقولہ ہیں تو وہ فلوروسینس کا اخراج بھی کرسکتے ہیں۔ فلوروسینس مائکروسکوپی اس طرح کے مادوں پر کوالٹی اور مقداری تحقیق کے لئے ایک ٹول ہے۔
2. فلوروسینس مائکروسکوپ کا اصول:
(a) روشنی کا ماخذ: روشنی کا ماخذ مختلف طول موج (الٹرا وایلیٹ سے اورکت تک) کی روشنی کا اخراج کرتا ہے۔
(ب) جوش و خروش فلٹر لائٹ ماخذ: ایک مخصوص طول موج کی روشنی کو منتقل کرنا جو نمونہ میں فلوروسینس کا سبب بن سکتا ہے ، جبکہ روشنی کو مسدود کرنا جو دلچسپ فلوروسینس کے لئے بیکار ہے۔
(c) فلوروسینٹ نمونوں: عام طور پر فلوروسینٹ روغنوں سے داغدار ہوتا ہے۔
(د) فلٹر کو مسدود کرنا: یہ اتیجیت کی روشنی کو مسدود کرکے فلوروسینس کو منتخب طور پر منتقل کرتا ہے جو نمونہ کے ذریعہ جذب نہیں ہوتا ہے ، اور فلوروسینس میں کچھ طول موج بھی منتخب طور پر منتقل ہوتی ہے۔ ایک مائکروسکوپ جو الٹرا وایلیٹ لائٹ کو روشنی کے ماخذ کے طور پر استعمال کرتا ہے تاکہ روشن شے کو فلوروسینس کو خارج کیا جاسکے۔ الیکٹران مائکروسکوپ کو پہلی بار 1931 میں جرمنی کے برلن میں نور اور ہروسکا نے جمع کیا تھا۔ یہ مائکروسکوپ ہلکی بیم کے بجائے تیز رفتار الیکٹران بیم استعمال کرتا ہے۔ روشنی کی لہروں کے مقابلے میں الیکٹران کے بہاؤ کی بہت کم طول موج کی وجہ سے ، الیکٹران مائکروسکوپ کی میگنیفیکیشن 8 0 0000 بار تک پہنچ سکتی ہے ، جس میں کم سے کم ریزولوشن حد 0.2 نینو میٹر ہے۔ اسکیننگ الیکٹران مائکروسکوپ ، جو پہلی بار 1963 میں استعمال ہوا تھا ، لوگوں کو اشیاء کی سطح پر چھوٹے چھوٹے ڈھانچے دیکھنے کی اجازت دیتا ہے۔
3. درخواست کا دائرہ: چھوٹی چھوٹی اشیاء کی تصاویر کو وسعت دینے کے لئے استعمال کیا جاتا ہے۔ عام طور پر حیاتیات ، طب ، خوردبین ذرات وغیرہ کے مشاہدات کے لئے استعمال کیا جاتا ہے۔
کنفوکل مائکروسکوپ
1. کنفوکال مائکروسکوپ نے عکاس روشنی والے راستے میں ایک نیم عکاس آدھے لینس کا اضافہ کیا ہے ، جو عکاس روشنی کو موڑ دیتا ہے جو دوسری سمتوں میں عینک سے گزر چکا ہے۔ اس کے فوکل پوائنٹ پر ، فوکل پوائنٹ پر واقع ایک پن ہول کے ساتھ ایک بافل ہے ، اور بافل کے پیچھے فوٹووملٹیپلر ٹیوب ہے۔ یہ تصور کیا جاسکتا ہے کہ پتہ لگانے سے پہلے اور اس کے بعد عکاس روشنی کو اس کنفوکل سسٹم کے ذریعہ چھوٹے سوراخ پر مرکوز نہیں کیا جاسکتا ہے اور اس کو بافل کے ذریعہ مسدود کردیا جائے گا۔ لہذا فوٹوومیٹر فوکل پوائنٹ پر روشنی کی شدت کی عکاسی کرتا ہے۔
2. اصول: روایتی آپٹیکل مائکروسکوپز فیلڈ لائٹ ذرائع کا استعمال کرتے ہیں ، اور نمونہ پر ہر نقطہ کی تصویر پڑوسی نکات سے پھیلاؤ یا بکھرے ہوئے روشنی سے متاثر ہوتی ہے۔ لیزر اسکیننگ کنفوکل مائکروسکوپ ایک پنہول کو روشن کرنے اور نمونہ کے فوکل ہوائی جہاز پر ہر نقطہ کو اسکین کرنے کے لئے ایک نقطہ روشنی کا ذریعہ بنانے کے لئے لیزر بیم کا استعمال کرتا ہے۔ نمونہ پر روشن نقطہ پتہ کا پتہ لگانے کے پنہول پر امیج کیا جاتا ہے ، اور وہ فوٹوملٹ پلئیر ٹیوب (پی ایم ٹی) یا کولڈ جوڑے کے آلے (سی سی سی ڈی) کے ذریعہ پوائنٹ یا لائن کے ذریعہ پوائنٹ یا لائن کے ذریعہ موصول ہوتا ہے ، جس سے کمپیوٹر مانیٹر اسکرین پر تیزی سے فلوروسینس امیج تشکیل دیا جاتا ہے۔ الیومینیشن پنہول اور پتہ لگانے کا پنہول معروضی عینک کے فوکل طیارے کے نسبت کنجوجٹ ہیں۔ فوکل طیارے کے نکات بیک وقت الیومینیشن پنہول اور اخراج پنہول پر مرکوز ہیں ، اور فوکل طیارے کے باہر کے نکات کا پتہ لگانے کے پنہول پر امیج نہیں کیا جائے گا۔ نتیجے میں کنفوکال امیج نمونہ کا آپٹیکل کراس سیکشن ہے ، جو عام مائکروسکوپوں میں دھندلا پن کی تصاویر کے نقصان پر قابو پاتا ہے۔
