فلوروسینس خوردبین اور عام نظری خوردبین کے اختلافات اور خصوصیات
فلوروسینس مائیکروسکوپ اور عام آپٹیکل مائیکروسکوپ مختلف ہیں، یہ نمونے کا مشاہدہ کرنے کے لیے عام روشنی کے منبع کی روشنی کے ذریعے نہیں، بلکہ روشنی کی ایک مخصوص طول موج (عام طور پر بالائے بنفشی، نیلی بنفشی روشنی) کے استعمال سے نمونے کے اندر فلوروسینٹ مواد کی حوصلہ افزائی ہوتی ہے۔ مائکروسکوپ کے نیچے، تاکہ فلوروسینس مائکروسکوپ لائٹ ماخذ کی مائدیپتی براہ راست الیومینیشن نہیں کھیلتی، لیکن توانائی کے منبع کے نمونے کے اندر فلوروسینٹ مواد کی ایک قسم کے طور پر۔ ہم نمونے کا مشاہدہ کرنے کی وجہ روشنی کے منبع کی روشنی کی وجہ سے نہیں ہے، بلکہ جوش کی روشنی کی توانائی کو جذب کرنے کے بعد نمونہ میں فلوروسینٹ مواد کے ذریعہ پیش کردہ فلوروسینس رجحان ہے۔ یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ فلوروسینس مائیکروسکوپ کی خصوصیات، بنیادی طور پر اس کا روشنی کا منبع اتیجیت روشنی کی مخصوص طول موج کی حد کی ایک بڑی تعداد فراہم کر سکتا ہے، تاکہ جانچ شدہ نمونے کے اندر موجود فلوروسینٹ مواد جوش کی روشنی کی ضروری شدت حاصل کر سکے۔ ایک ہی وقت میں، فلوروسینس مائکروسکوپ میں متعلقہ فلٹر سسٹم ہونا ضروری ہے۔ فلوروسینس مائکروسکوپ فلوروسینس ہسٹو کیمسٹری کا بنیادی ٹول ہے۔ یہ انتہائی ہائی پریشر لائٹ سورس، فلٹر سسٹم (بشمول جوش اور دبانے والی فلٹر پلیٹ)، آپٹیکل سسٹم اور فوٹو گرافی کے نظام اور دیگر اہم اجزاء پر مشتمل ہے، یہ نمونہ کو فلوروسینس کے اخراج کے لیے متحرک کرنے کے لیے روشنی کی ایک مخصوص طول موج کا استعمال ہے۔
1. فلوروسینس اتیجیت کا طریقہ: روشنی کی طول موج کی حد کے مطابق UV اتیجیت طریقہ (الٹرا وایلیٹ الیومینیشن کا استعمال کرتے ہوئے) اور BV اتیجیت طریقہ (نیلی بنفشی روشنی کا استعمال کرتے ہوئے) دو قسم کے UV اتیجیت کا طریقہ الٹرا وایلیٹ لائٹ کے قریب 400nm سے چھوٹا ہے۔ جوش اس طریقہ کار میں کوئی مرئی جوش کی روشنی نہیں ہے، اس لیے مشاہدہ شدہ فلوروسینس ڈائی کی موروثی فلوروسینس کو ظاہر کرتا ہے، اور نمونے پر موجود مخصوص فلوروسینس کو بیک گراؤنڈ ٹشو کے خود فلوروسینس سے الگ کرنا آسان ہے۔
2. BV اتیجیت کا طریقہ: یہ طریقہ 404nm، 434nm پر الٹرا وائلٹ سے نیلی روشنی تک جوش کے لیے مرکوز ہے۔ یہ طریقہ نمونے کو روشن کرنے کے لیے نیلی روشنی کا استعمال کرتا ہے، اس لیے فلوروسینس مشاہداتی نظام کے کٹ آف فلٹر کو ایسا فلٹر استعمال کرنا چاہیے جو نیلی روشنی کو مکمل طور پر روک سکے اور مطلوبہ سبز اور پیلے رنگ کے فلوروسینس کو مناسب طریقے سے پاس کر سکے۔ فلوروسینٹ اینٹی باڈی طریقہ کے لیے فلوروسینٹ روغن۔ چونکہ اتیجیت روشنی کے زیادہ سے زیادہ جذب کی طول موج اور فلوروسینس کے زیادہ سے زیادہ اخراج کی طول موج ایک دوسرے کے قریب ہیں، اس لیے BV اتیجیت کے طریقہ کار میں استعمال ہونے والے فلٹرز کو تیز کٹ آف فلٹرز ہونا چاہیے۔ یہ طریقہ نیلی روشنی کو جوش کی روشنی کے طور پر استعمال کرتا ہے، اس لیے فلورو کروم کی جذب کرنے کی کارکردگی زیادہ ہوتی ہے اور ایک روشن تصویر حاصل کی جا سکتی ہے۔ نقصان یہ ہے کہ 500 nm سے نیچے فلوروسینس نہیں دیکھا جا سکتا، اور 500 nm سے اوپر پوری تصویر پیلی نظر آتی ہے۔ فلوروسینٹ اینٹی باڈی کے طریقہ کار میں، زیادہ تر خصوصیات کا اندازہ فلورو کروم کے منفرد رنگ سے کیا جاتا ہے، اس لیے اوپر بیان کیے گئے BV اتیجیت کے طریقے کے نقصانات جب ٹھیک ٹھیک خصوصیت پر بحث کرتے ہیں تو بہت زیادہ اثر انداز ہوتے ہیں۔
