فلوروسینس خوردبین کے استعمال کے طریقے اور احتیاطی تدابیر
استعمال کا طریقہ:
(1) میٹریل شیٹ کو کیریئر اسٹیج پر رکھیں۔
(2) فلوروسینس مائکروسکوپ وولٹیج ریگولیٹر کو آن کریں۔ پھر یووی لیمپ کو جلانے کے لیے اسٹارٹ گروپ کو دبائیں 15 منٹ کے لیے بند نہیں کیا جائے گا، اور اسے بند کرنے کے بعد 3 منٹ تک دوبارہ شروع نہیں کیا جائے گا۔
(3) ایکسائٹیشن فلٹر کو وی میں، ڈیکروک فلم کو وی میں تبدیل کریں، 495 یا 475nm بلاکنگ فلٹر کا انتخاب کریں۔
(4) uvFL40، uvFL100 فلوروسینس حاصل کرنے والی معروضی لینس مائکروسکوپی کا انتخاب کریں۔
(5) سلائیڈ پر نان فلوروسینٹ آئل شامل کریں، پہلے 40 ایکس، اور پھر 100 ایکس فوکسنگ مائکروسکوپی۔ فلوروسینس دکھائیں۔
(7) کیونکہ فلوروسینٹ کی افزائش کے ساتھ بالائے بنفشی شعاع ریزی سے فلوروسینٹ مواد وقت کے ساتھ ساتھ آہستہ آہستہ کمزور ہوتا جاتا ہے، اس لیے خوردبینی امتحان کو کثرت سے نقطہ نظر کے میدان کو تبدیل کرنا چاہیے۔
(8) uvFL10 یا uvFL20 کم میگنیفیکیشن مائیکروسکوپی مواد (نان فلوروسینٹ آئل شامل کیے بغیر کم میگنیفیکیشن کے ساتھ) بھی استعمال کر سکتے ہیں۔
فلوروسینس امیج ریکارڈنگ کا طریقہ:
فلوروسینس مائیکروسکوپ کے ذریعے دیکھی جانے والی فلوروسینس امیج، ایک مورفولوجیکل خصوصیات کے ساتھ ہے، دوسری فلوروسینس کے رنگ اور چمک کے ساتھ ہے، نتائج کو جانچنے میں، دونوں کو ایک جامع فیصلے کے ساتھ ملایا جانا چاہیے۔ نتائج سبجیکٹیو انڈیکیٹرز کے مطابق ریکارڈ کیے جاتے ہیں، یعنی کارکن کے بصری مشاہدے کے ذریعے۔ ایک عام گتاتمک مشاہدے کے طور پر، بنیادی طور پر قابل اعتماد۔ ٹیکنالوجی اور سائنس کی ترقی کے ساتھ، مختلف ڈگریوں تک، فیصلے کے نتائج کو ریکارڈ کرنے کے لیے معروضی اشارے کا استعمال، جیسے سیل سپیکٹرو فوٹومیٹر، تصویری تجزیہ کار اور دیگر آلات کا استعمال۔ تاہم، ان آلات کے ذریعے ریکارڈ کیے گئے نتائج کو موضوعی فیصلے کے ساتھ بھی ملایا جانا چاہیے۔
فلوروسینس مائیکروسکوپ فوٹو گرافی ٹیکنالوجی فلوروسینس امیجز کو ریکارڈ کرنے کے لیے بہت ضروری ہے، کیونکہ فلوروسینس کو دھندلا اور کمزور کرنا آسان ہے، تاکہ فوٹو گرافی کے نتائج کو فوری طور پر ریکارڈ کیا جا سکے۔ طریقہ بنیادی طور پر عام مائکروگرافی جیسا ہی ہے۔ بس تیز رفتار فوٹو گرافی فلم استعمال کرنے کی ضرورت ہے جیسے ASA200 اوپر یا 24. اوپر۔ چونکہ فلوروسینس برسٹ اثر پر بالائے بنفشی روشنی، جیسے FITC مارکر، الٹرا وایلیٹ لائٹ شعاع ریزی 30s میں، فلوروسینس کی چمک 50٪ تک کم ہو جاتی ہے۔ لہذا، فلوروسینس امیج کو حاصل کرنے کے لیے نمائش کی رفتار بہت سست ہے۔ جنرل ریسرچ فلوروسینس مائکروسکوپ میں نیم خودکار یا مکمل طور پر خودکار مائیکرو فوٹوگرافی سسٹم کے آلات ہوتے ہیں۔
احتیاطی تدابیر:
(1) فلوروسینس مائکروسکوپ فیکٹری دستی کی ضروریات کے مطابق سختی سے کام کریں، طریقہ کار کو من مانی طور پر تبدیل نہ کریں۔
(2) معائنہ اندھیرے کے کمرے میں کیا جانا چاہئے. ڈارک روم میں داخل ہونے کے بعد، پاور سپلائی کو جوڑیں، الٹرا ہائی پریشر والے مرکری لیمپ کو 5-15 منٹ کے لیے روشن کریں، جب تک روشنی کا منبع مستحکم ہونے کے لیے ایک مضبوط روشنی خارج نہ کرے، اور آنکھیں مکمل طور پر اندھیرے کے کمرے میں ڈھال لیں، اور پھر نمونہ کا مشاہدہ شروع کریں.
(3) بالائے بنفشی روشنی سے آنکھوں کو پہنچنے والے نقصان کو روکنے کے لیے، روشنی کے منبع کو ایڈجسٹ کرتے وقت حفاظتی شیشے پہننا چاہیے۔
(4) ہر بار 1 ~ 2h مناسب وقت کی جانچ پڑتال کریں، 90 منٹ سے زیادہ، الٹرا ہائی پریشر مرکری لیمپ چمکیلی شدت میں آہستہ آہستہ کمی واقع ہوئی، فلوروسینس کمزور؛ الٹرا وایلیٹ لائٹ 3 ~ 5 منٹ سے شعاع شدہ نمونے، فلوروسینس بھی نمایاں طور پر کمزور ہو گیا ہے۔ لہذا، * 2 ~ 3h سے زیادہ نہیں ہوگا۔
(5) فلوروسینس مائکروسکوپ لائٹ ماخذ کی زندگی محدود ہے، نمونہ کو مرکزی معائنہ کرنا چاہیے، تاکہ وقت کی بچت ہو اور روشنی کے منبع کی حفاظت ہو۔ جب یہ گرم ہے، پنکھے کو کولنگ شامل کرنا چاہئے، نئے بلب کو وقت کے استعمال کے آغاز سے ریکارڈ کیا جانا چاہئے. جب چراغ بجھ جاتا ہے اور دوبارہ استعمال کرنا چاہتا ہے، تو روشنی سے پہلے بلب کو کافی حد تک ٹھنڈا کرنا چاہیے۔ روشنی کے منبع سے کئی بار گریز کرنا چاہیے۔
(6) داغ لگنے کے فوراً بعد نمونے کا مشاہدہ کریں، کیونکہ وقت کے ساتھ ساتھ فلوروسینس آہستہ آہستہ کم ہوتا جائے گا۔ اگر نمونہ کو پولی تھیلین پلاسٹک بیگ میں 4 ڈگری پر رکھا جائے تو یہ فلوروسینس کے کمزور ہونے کے وقت میں تاخیر کر سکتا ہے اور سیلنگ ایجنٹ کے بخارات کو روک سکتا ہے۔
(7) فلوروسینس چمک کے لیے فیصلے کا معیار: عام طور پر چار سطحوں میں تقسیم کیا جاتا ہے، یعنی 'ایک' - نہیں یا نظر آنے والی کمزور فلوروسینس۔ '+' - صرف واضح دکھائی دینے والا فلوروسینس۔ '+ +' - روشن کے ساتھ دکھائی دیتا ہے۔
