الٹی خوردبین اور فلوروسینس مائکروسکوپ کے درمیان انتخاب کیسے کریں؟
سیل کلچر اور متعلقہ مشتق تجربات میں، خوردبین ایک بہت اہم آلہ ہے۔ اس وقت مارکیٹ میں مختلف قسم کے خوردبین موجود ہیں۔ ایسی خوردبین کا انتخاب کرنا ایک چیلنج ہے جو ضروریات کو پورا کرتا ہو اور قابل اطلاق ہو۔ ذیل میں الٹی خوردبین اور فلوروسینس خوردبین کے اصولوں کا تعارف ہے، تاکہ آپ آسانی سے انتخاب کر سکیں۔
الٹی خوردبین کی ساخت عام خوردبین کی طرح ہی ہے، جس میں بنیادی طور پر تین حصے شامل ہیں: مکینیکل حصہ، روشنی کا حصہ، اور نظری حصہ۔ الٹی خوردبین کی ساخت عام سیدھی خوردبین کی طرح ہی ہے، سوائے اس کے کہ معروضی لینس اور روشنی کا نظام الٹ دیا گیا ہے، سابقہ اسٹیج کے نیچے ہے، اور مؤخر الذکر اسٹیج کے اوپر ہے۔ اس طرح کا ڈھانچہ روشنی کے ارتکاز کے نظام اور اسٹیج کے درمیان موثر فاصلے کو نمایاں طور پر بڑھا سکتا ہے، جو کہ موٹی چیزوں کو دیکھنے کے لیے آسان ہے، جیسے کلچر ڈشز اور سیل کلچر کی بوتلیں (یقیناً، شیشے کی سلائیڈیں وغیرہ بھی دستیاب ہیں) ، اور ایک ہی وقت میں، معروضی لینس اور مواد کے درمیان فاصلہ ان کے درمیان کام کا فاصلہ بہت بڑا نہیں ہونا چاہیے۔ الٹی خوردبینوں کا استعمال مائکروجنزموں، خلیات، بیکٹیریا، ٹشو کلچر، معطلی، تلچھٹ وغیرہ کے طبی اور صحت کے یونٹوں، اعلیٰ تعلیم کے اداروں اور تحقیقی اداروں میں مشاہدے کے لیے کیا جاتا ہے۔ یہ کلچر میڈیم میں خلیات، بیکٹیریا وغیرہ کی تولید اور تقسیم کے عمل کا مسلسل مشاہدہ کر سکتا ہے، اور اس عمل میں کسی بھی شکل کی تصویریں لے سکتا ہے۔ یہ بڑے پیمانے پر سائٹولوجی، پیراسیٹولوجی، آنکولوجی، امیونولوجی، جینیاتی انجینئرنگ، صنعتی مائکرو بایولوجی، نباتیات اور دیگر شعبوں میں استعمال ہوتا ہے۔
فلوروسینس مائیکروسکوپی کا استعمال خلیوں میں مادوں کے جذب اور نقل و حمل، کیمیائی مادوں کی تقسیم اور لوکلائزیشن وغیرہ کا مطالعہ کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ زیرِ معائنہ شے کے لیے، فلوروسینس پیدا کرنے کے دو طریقے ہیں: آٹو فلوروسینس، جو الٹرا وائلٹ کے ساتھ شعاع ریزی کے بعد براہ راست فلوروسینس خارج کرتا ہے۔ روشنی خلیات میں کچھ مادے، جیسے کہ کلوروفیل، الٹرا وایلیٹ شعاعوں سے شعاع ہونے کے بعد آٹو فلوروسینس پیدا کرتے ہیں۔ اگرچہ کچھ مادے خود فلوروسینٹ نہیں ہوسکتے ہیں، وہ الٹرا وایلیٹ شعاعوں سے شعاع ہونے کے بعد فلوروسینٹ رنگوں یا فلوروسینٹ اینٹی باڈیز سے داغے جانے کے بعد ثانوی فلوروسینس بھی خارج کرسکتے ہیں۔ فلوروسینس مائیکروسکوپ ایک خاص طول موج (الٹرا وائلٹ لائٹ 365nm یا پرپل بلیو لائٹ 420nm) کی روشنی کو ایکسائٹیشن لائٹ کے طور پر خارج کرنے کے لیے اعلی برائٹ کارکردگی کے ساتھ ایک پوائنٹ لائٹ سورس کا استعمال کرتی ہے، اور نمونے میں فلوروسینٹ مادوں کو پرجوش کرنے کے بعد مختلف فلوروسینس کے اخراج کے لیے۔ رنگ، پھر آبجیکٹو لینس اور آئی پیس کی میگنیفیکیشن کے ذریعے مشاہدہ کیا جاتا ہے۔ اس طرح، ایک مضبوط کنٹراسٹ پس منظر کے تحت، یہاں تک کہ اگر فلوروسینس بہت کمزور ہے، اس کی شناخت کرنا آسان ہے اور اس میں حساسیت زیادہ ہے۔ یہ بنیادی طور پر سیل کی ساخت اور فنکشن اور کیمیائی ساخت کی تحقیق کے لیے استعمال ہوتا ہے۔
فلوروسینس خوردبین کو ٹرانسمیشن کی قسم اور ایپی انجیکشن کی قسم میں تقسیم کیا گیا ہے، سابقہ زیادہ قدیم ہے اور مؤخر الذکر زیادہ جدید ہے۔ دو قسم کے فلوروسینس مائیکروسکوپس کی بنیادی ساخت ایک جیسی ہے، بنیادی فرق یہ ہے: ٹرانسمیشن کی قسم کی جوش کی روشنی نمونے سے گزرتی ہے، اور پورا نمونہ فلوروسینس پیدا کرتا ہے، جو پھر معروضی عینک میں داخل ہوتا ہے۔ جتنی زیادہ میگنیفیکیشن ہوگی، فلوروسینس اتنا ہی کمزور ہوگا۔ epi-Emission قسم کی اتیجیت روشنی نمونے کی سطح پر پیش کی جاتی ہے، نمونہ کی سطح فلوروسینس پیدا کرتی ہے، اور فلوروسینس دوبارہ معروضی لینس میں داخل ہوتی ہے۔ میگنیفیکیشن جتنی زیادہ ہوگی، فلوروسینس اتنا ہی مضبوط ہوگا، جو ہائی میگنیفیکیشن کے مشاہدے کے لیے موزوں ہے۔ فلوروسینس مائیکروسکوپ کے اہم اجزاء میں مرکری لیمپ لائٹ سورس، ایکزیٹیشن فلٹر پلیٹ، ڈیکروک آئینے (قسط کی قسم)، ایک دبائی ہوئی فلٹر پلیٹ، اور ایک ڈارک فیلڈ کنڈینسر (ٹرانسمیشن کی قسم) وغیرہ شامل ہیں۔ مرکری لیمپ کی شدید گرمی کی پیداوار، ان میں سے اکثر گرمی کو جذب کرنے والے فلٹرز سے بھی لیس ہیں۔ کچھ فلوروسینس خوردبینوں میں مرحلے کے برعکس مقاصد اور اینولر ڈایافرام بھی ہوتے ہیں، لہذا مرحلے کے برعکس مشاہدات ممکن ہیں۔ فلوروسینٹ خوردبینیں بھی ہیں جو ایک الٹی ساخت، دوسری الٹی خوردبین، وغیرہ کو اپناتی ہیں۔
اس کے علاوہ، مندرجہ بالا مائیکروسکوپ کو ایک سی سی ڈی لگا کر ڈیجیٹل مائیکروسکوپ میں جمع کیا جا سکتا ہے، جو مائکروسکوپ کے ذریعے دیکھی جانے والی جسمانی تصویر کو ڈیجیٹل سے اینالاگ کنورژن کے ذریعے کمپیوٹر پر تصویر میں تبدیل کر دیتا ہے۔ لہذا، ہم مائکروسکوپک فیلڈ پر تحقیق کو روایتی عام دوربین مشاہدے سے ڈسپلے پر تولید میں تبدیل کر سکتے ہیں، اس طرح کام کی کارکردگی کو بہتر بنایا جا سکتا ہے۔
