لیزر سکیننگ ملٹی فوٹون مائکروسکوپ کے بہتر فوائد
لیزر اسکیننگ ملٹی فوٹون مائکروسکوپ آپٹیکل مائکروسکوپ کی ایک اہم بہتری ہے، جو بنیادی طور پر یہ ظاہر کرتی ہے کہ یہ زندہ خلیوں، فکسڈ سیلز اور ٹشوز کی گہری ساخت کا مشاہدہ کر سکتی ہے، اور واضح اور تیز ملٹی لیئر زیڈ پلین کی ساخت حاصل کر سکتی ہے، یعنی آپٹیکل سلائسز۔ ، جو نمونوں کی تین جہتی ٹھوس ساخت کی تعمیر کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ کنفوکل مائیکروسکوپ لیزر لائٹ سورس کا استعمال کرتا ہے، جو توسیع کے بعد معروضی لینس کے پورے پچھلے فوکل جہاز کو بھرتا ہے، اور پھر معروضی لینس کے لینس سسٹم سے گزرتا ہے تاکہ نمونے کے فوکل طیارے پر بہت چھوٹے پوائنٹس میں تبدیل ہو جائے۔ معروضی لینس کے عددی یپرچر کے مطابق، روشن ترین الیومینیشن پوائنٹ کا قطر تقریباً 0.25 ~ 0.8μm ہے اور گہرائی تقریباً 0.5 ~ 1.5 μm ہے .. کوپولیمرائزیشن فوکس کا سائز مائکروسکوپ ڈیزائن، لیزر ویو لینتھ، معروضی لینس کی خصوصیات، اسکیننگ یونٹ کی حالت کی ترتیب اور نمونہ کی خصوصیات پر منحصر ہے۔ فیلڈ مائکروسکوپ کی روشنی کی حد اور گہرائی بہت بڑی ہے، جبکہ کنفوکل مائکروسکوپ کی روشنی فوکل ہوائی جہاز پر * * فوکس پر مرکوز ہے۔ کنفوکل مائکروسکوپ کا سب سے بنیادی فائدہ یہ ہے کہ یہ موٹے فلوروسینٹ نمونوں کے باریک نظری سلائسیں بنا سکتا ہے (جو 50 μm یا اس سے زیادہ تک پہنچ سکتا ہے)، اور سلائسوں کی موٹائی تقریباً 0.5 سے 1.5 μm ہوتی ہے۔ مائیکروسکوپ کی Z-axis اسٹیپنگ موٹر کے ذریعے نمونے کو اوپر اور نیچے لے کر آپٹیکل سلائس امیجز کا ایک سلسلہ حاصل کیا جا سکتا ہے۔ تصویر کی معلومات کے حصول کو پہلے جہاز میں کنٹرول کیا جاتا ہے اور نمونے پر دیگر پوزیشنوں سے سگنلز سے پریشان نہیں ہوں گے۔ بیک گراؤنڈ فلوروسینس کے اثر کو ہٹانے اور سگنل ٹو شور کے تناسب میں اضافہ کرنے کے بعد، روایتی فیلڈ الیومینیشن فلوروسینس امیج کے مقابلے میں confocal امیج کا کنٹراسٹ اور ریزولوشن واضح طور پر بہتر ہوتا ہے۔ بہت سے نمونوں میں، بہت سے پیچیدہ ساختی اجزاء ایک پیچیدہ نظام کی تشکیل کے لیے آپس میں جڑے ہوتے ہیں، لیکن ایک بار جب کافی آپٹیکل حصوں کو اکٹھا کر لیا جائے، تو ہم سافٹ ویئر کے ذریعے انہیں تین جہتوں میں دوبارہ تشکیل دے سکتے ہیں۔ یہ تجرباتی طریقہ حیاتیاتی تحقیق میں خلیات یا بافتوں کے درمیان پیچیدہ ساختی اور فعال تعلق کو واضح کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے۔
