فلوروسینس مائیکروسکوپی کا تعارف
فلوروسینس مائیکروسکوپی کا مقصد فلوروسین سے داغے ہوئے شے کو مختصر طول موج کی روشنی کے ساتھ روشن کرنا ہے، تاکہ یہ لمبی طول موج کی فلوروسینس پیدا کرنے کے لیے پرجوش ہو، اور پھر مشاہدہ کیا جائے۔ فلوروسینس مائیکروسکوپ میں، فلوروسینس پیدا کرنے کے لیے ایک مخصوص طول موج کی اتیجیت روشنی کو نمونے کی الیومینیشن لائٹ سے منتخب کیا جانا چاہیے، اور پھر فلوروسینس کو مشاہدے کے لیے جوش کی روشنی اور فلوروسینس کی مخلوط روشنی سے الگ کرنا چاہیے۔ لہذا، فلٹر سسٹم ایک مخصوص طول موج کے انتخاب میں انتہائی اہم کردار ادا کرتا ہے۔ فلوروسینس خوردبینیں بڑے پیمانے پر حیاتیات، طب اور دیگر شعبوں میں استعمال ہوتی ہیں۔
1. فلوروسینس مائکروسکوپ کے اہم اجزاء:
(الف) روشنی کا منبع: روشنی کا منبع مختلف طول موجوں کی روشنی (بالائے بنفشی سے اورکت تک) پھیلاتا ہے۔ دی
(B) اتیجیت فلٹر روشنی کا ذریعہ: ایک مخصوص طول موج کی روشنی کے ذریعے جو نمونہ کو فلوروسینس پیدا کرنے کا سبب بن سکتا ہے، جبکہ روشنی کو روکتا ہے جو دلچسپ فلوروسینس کے لیے بیکار ہے۔ دی
(C) فلوروسینٹ نمونے: عام طور پر فلوروسینٹ روغن سے داغے ہوتے ہیں۔ دی
(D) بلاک کرنے والا فلٹر: جوش کی روشنی کو روکیں جو نمونہ کے ذریعے جذب نہیں ہوتی ہے اور منتخب طور پر فلوروسینس کو منتقل کرتی ہے، اور کچھ طول موجیں منتخب طور پر فلوروسینس میں منتقل ہوتی ہیں۔
دی
2. فلوروسینس خوردبین کی درجہ بندی:
فلوروسینس خوردبین کو عام طور پر دو اقسام میں تقسیم کیا جاتا ہے: ٹرانسمیشن اور ایپی ایمیشن:
a ٹرانسمیشن کی قسم: اتیجیت روشنی معائنہ کرنے کے لئے آبجیکٹ کے نیچے سے آتی ہے، اور کنڈینسر ایک تاریک فیلڈ کنڈینسر ہے، تاکہ جوش کی روشنی معروضی لینس میں داخل نہ ہو، لیکن فلوروسینس معروضی لینس میں داخل ہوتی ہے۔ یہ کم میگنیفیکیشن پر روشن ہے، لیکن زیادہ میگنیفیکیشن پر گہرا ہے۔ تیل وسرجن اور سینٹرنگ میں کام کرنا مشکل ہے۔ کم میگنیفیکیشن پر روشنی کی حد کا تعین کرنا خاص طور پر مشکل ہے، لیکن یہ منظر کے پس منظر کا بہت تاریک فیلڈ حاصل کر سکتا ہے۔ ٹرانسمیشن کی قسم غیر شفاف اشیاء کے لیے استعمال نہیں ہوتی ہے۔ دی
ب Epi-type: ٹرانسمیشن کی قسم فی الحال تقریباً ختم ہو چکی ہے۔ زیادہ تر نئے فلوروسینس خوردبین ایپی قسم کے ہیں۔ روشنی کا منبع معائنہ کرنے کے لیے آبجیکٹ کے اوپر سے آتا ہے، اور آپٹیکل راستے میں ایک بیم سپلٹر ہوتا ہے، اس لیے یہ شفاف اور مبہم دونوں چیزوں کے معائنہ کے لیے موزوں ہے۔ چونکہ معروضی لینس ایک کنڈینسر لینس کے طور پر کام کرتا ہے، اس لیے اسے کام کرنا نہ صرف آسان ہے، بلکہ یہ کم میگنیفیکیشن سے لے کر ہائی میگنیفیکیشن تک پورے فیلڈ آف ویو کی یکساں روشنی بھی حاصل کر سکتا ہے۔ دی
دی
3. فلوروسکوپی کے لیے احتیاطی تدابیر
a اتیجیت روشنی کی طویل مدتی شعاعیں فلوروسینس کشندگی اور بجھانے کا سبب بنیں گی، لہذا مشاہدے کے وقت کو جتنا ممکن ہو کم کریں، اور عارضی طور پر مشاہدہ نہ کرنے پر جوش کی روشنی کو ڈھانپنے کے لیے ایک چکرا کا استعمال کریں۔ دی
ب تیل وسرجن لینس کے ساتھ مشاہدہ کرتے وقت، "نان فلوروسینٹ تیل" استعمال کریں۔ دی
c فلوروسینس تقریبا ہمیشہ کمزور ہے اور ایک تاریک کمرے میں کیا جانا چاہئے. دی
ڈی پاور سپلائی میں وولٹیج سٹیبلائزر لگانا بہتر ہے، ورنہ غیر مستحکم وولٹیج نہ صرف مرکری لیمپ کی زندگی کو کم کرے گا، بلکہ مائکروسکوپ کے معائنے کے اثر کو بھی متاثر کرے گا۔ دی
دی
4. فلوروسینس مائیکروسکوپی کا استعمال
1. فلوروسینس مائکروسکوپ کے نمونوں کے لیے تیاری کی ضروریات
a شیشے کی سلائیڈ
شیشے کی سلائیڈ کی موٹائی 0.8 اور 1.2 ملی میٹر کے درمیان ہونی چاہیے۔ ایک سلائڈ جو بہت موٹی ہے ایک طرف زیادہ روشنی جذب کرے گی، اور دوسری طرف، جوش کی روشنی کو نمونے پر مرکوز نہیں کیا جا سکتا۔ سلائیڈز ہموار، موٹائی میں یکساں اور واضح آٹو فلوروسینس سے پاک ہونی چاہئیں۔ کبھی کبھی کوارٹج شیشے کی سلائیڈیں استعمال کی جاتی ہیں۔ دی
ب شیشے کو ڈھانپیں۔
کور گلاس کی موٹائی تقریباً 0.17 ملی میٹر، ہموار ہے۔ حوصلہ افزائی کی روشنی کو مضبوط بنانے کے لیے، ایک خشک کور گلاس بھی استعمال کیا جا سکتا ہے، جو کہ ایک خاص کور گلاس ہے جس میں مادوں کی کئی تہوں (جیسے میگنیشیم فلورائیڈ) کا لیپت ہوتا ہے جو مختلف طول موجوں کی روشنی پر مختلف مداخلت کے اثرات مرتب کرتا ہے، جس کی وجہ سے روشنی کی روشنی پر اثر پڑتا ہے۔ فلوروسینس آسانی سے جانا. حوصلہ افزائی کی روشنی گزر جاتی ہے، اور منعکس حوصلہ افزائی کی روشنی نمونہ کو حوصلہ افزائی کرتی ہے. دی
c نمونہ
ٹشو کے ٹکڑے یا دیگر نمونے زیادہ موٹے نہیں ہونے چاہئیں۔ اگر یہ بہت موٹی ہے تو، زیادہ تر جوش کی روشنی نمونے کے نچلے حصے میں کھائی جائے گی، جب کہ اوپری حصے کو معروضی لینس کے ذریعے براہ راست مشاہدہ کیا جا سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، سیل اوورلیپ یا نجاست چھپ جاتی ہے، جو فیصلے کو متاثر کرتی ہے۔ دی
ڈی بڑھتے ہوئے ایجنٹ
گلیسرین کو عام طور پر ایک بڑھتے ہوئے ایجنٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، جس میں کوئی آٹو فلوروسینس، بے رنگ اور شفاف نہیں ہونا چاہیے، اور فلوروسینس کی چمک pH 8 پر زیادہ روشن ہوتی ہے۔{1}}.5، اور اسے جلدی ختم ہونا آسان نہیں ہوتا ہے۔ لہٰذا، گلیسرول اور 0.5mol/L کاربونیٹ بفر محلول کا مساوی مرکب جس کا pH 9{6}} سے 9.5 ہے عام طور پر بڑھتے ہوئے ایجنٹ کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ دی
e آئینے کا تیل
عام طور پر، ڈارک فیلڈ فلوروسینس مائیکروسکوپس اور آئل وسرجن وسرجن مقاصد کے ساتھ نمونوں کا مشاہدہ کرتے وقت وسرجن کا تیل استعمال کرنا چاہیے۔ خاص نان فلوروسینٹ آئینے کا تیل استعمال کرنا بہتر ہے، جسے اوپر دی گئی گلیسرین سے بھی تبدیل کیا جا سکتا ہے، اور مائع پیرافین بھی استعمال کیا جا سکتا ہے، لیکن ریفریکٹیو انڈیکس کم ہے، جو تصویر کے معیار کو قدرے متاثر کرتا ہے۔
