فلوروسینس مائکروسکوپ کا اصول اور تعمیر
فلوروسینس مائیکروسکوپ ایک اعلی برائٹ کارکردگی والے نقطہ روشنی کے ذریعہ کا استعمال کرتا ہے، جو روشنی کی ایک مخصوص طول موج (جیسے الٹرا وائلٹ لائٹ 3650 انچ یا وایلیٹ بلیو لائٹ 4200 انچ) رنگین فلٹرنگ سسٹم کے ذریعے ایکسائٹیشن لائٹ کے ذریعے خارج کرتا ہے، اور نمونے میں موجود فلوروسینٹ مادوں کو جوش دیتا ہے۔ فلوروسینس کے مختلف رنگوں کا اخراج۔ اس کے بعد اس کا مشاہدہ مقصد اور آئی پیس کی میگنیفیکیشن کے ذریعے کیا جاتا ہے۔ اس طرح، کمزور فلوروسینس کے ساتھ بھی، یہ مضبوط متضاد پس منظر کے تحت آسانی سے پہچانا جا سکتا ہے اور انتہائی حساس ہے، جو بنیادی طور پر سیل کی ساخت اور فنکشن کے ساتھ ساتھ کیمیائی ساخت کا مطالعہ کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ فلوروسینس مائکروسکوپ کا بنیادی ڈھانچہ ایک عام آپٹیکل مائکروسکوپ اور کچھ لوازمات (جیسے فلوروسینٹ لائٹ سورس، ایکسائٹیشن فلٹر، بائیکرومیٹک بیم سیپریٹر، اور بلاکنگ فلٹر وغیرہ) پر مشتمل ہوتا ہے۔ فلوروسینٹ روشنی کے ذرائع - عام طور پر انتہائی ہائی پریشر مرکری لیمپ (50-200W) استعمال کرتے ہیں، جو مختلف طول موج کی روشنی کو خارج کر سکتے ہیں۔ تاہم، ہر فلوروسینٹ مادہ میں ایک جوش والی روشنی کی طول موج ہوتی ہے جو سب سے مضبوط فلوروسینس پیدا کرتی ہے، اس لیے اتیجیت کے فلٹرز (عام طور پر الٹرا وایلیٹ، پرپل، بلیو، اور گرین ایکسائٹیشن فلٹرز) کو شامل کرنے کی ضرورت ہوتی ہے تاکہ اتیجیت روشنی کی صرف ایک مخصوص طول موج کو گزرنے اور روشن کرنے کی اجازت دی جا سکے۔ نمونہ، دوسری تمام روشنی کو جذب کرتے ہوئے۔ پرجوش روشنی سے شعاع ریزی ہونے کے بعد، ہر مادہ بہت کم وقت میں شعاع ریزی سے زیادہ لمبی طول موج کے ساتھ مرئی فلوروسینس خارج کرتا ہے۔ فلوروسینس کی خصوصیت ہے اور یہ عام طور پر جوش کی روشنی سے کمزور ہے۔ مخصوص فلوروسینس کا مشاہدہ کرنے کے لیے، معروضی لینس کے پیچھے ایک بلاکنگ (یا دبانے والا) فلٹر شامل کرنے کی ضرورت ہے۔ اس کے دو کام ہیں: اول، یہ جوش کی روشنی کو جذب کرتا ہے اور اسے آئی پیس میں داخل ہونے سے روکتا ہے۔ دوم، یہ مخصوص فلوروسینس کو منتخب کرتا ہے اور اس سے گزرنے کی اجازت دیتا ہے، ایک مخصوص فلوروسینس رنگ دکھاتا ہے۔ دونوں قسم کے فلٹرز کو ایک ساتھ استعمال کرنے کے لیے منتخب کیا جانا چاہیے۔
ان کے نظری راستے کی بنیاد پر فلوروسینس خوردبین کی دو قسمیں ہیں:
1. ٹرانسمیشن فلوروسینس مائیکروسکوپ: ایکسائٹیشن لائٹ ماخذ نمونہ مواد کے ذریعے ایک کنڈینسر کے ذریعے فلوروسینس کو اکسانے کے لیے منتقل کیا جاتا ہے۔ عام طور پر استعمال ہونے والے ڈارک فیلڈ لائٹ کلیکٹرز، یا عام لائٹ کلیکٹرز کو ریفلیکٹر کو ایڈجسٹ کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے تاکہ جوش کی روشنی اور سائیڈ لائٹ کو نمونے میں تبدیل کیا جا سکے۔ یہ نسبتاً پرانے زمانے کا فلوروسینس خوردبین ہے۔ اس کا فائدہ یہ ہے کہ فلوروسینس کم میگنیفیکیشن پر مضبوط ہے، جبکہ اس کا نقصان یہ ہے کہ میگنیفیکیشن بڑھنے پر فلوروسینس کمزور ہو جاتا ہے۔ لہذا، یہ بڑے نمونہ مواد کا مشاہدہ کرنے کے لئے بہتر ہے.
2. گرنے والی بیم فلوروسینس مائکروسکوپ یہ جدید دور میں تیار کی گئی فلوروسینس مائکروسکوپ کی ایک نئی قسم ہے۔ پچھلی روشنی کے برعکس، جوش کی روشنی معروضی لینس سے نمونے کی سطح پر گرتی ہے، اسی مقصدی لینس کا استعمال کرتے ہوئے جیسے الیومینیشن کمڈینسر اور فلوروسینس کو جمع کرنے کے لیے مقصدی لینس۔ آپٹیکل پاتھ میں دوہری رنگ کے بیم کو الگ کرنے والے کو شامل کرنے کی ضرورت ہے، جو ہلکے یورینیم کے 45 ڈگری کے زاویے پر ہے۔ جوش کی روشنی معروضی لینس میں منعکس ہوتی ہے اور نمونے پر مرکوز ہوتی ہے۔ نمونے سے پیدا ہونے والا فلوروسینس، نیز معروضی لینس اور کور شیشے کی سطح سے منعکس ہونے والی اتیجیت روشنی، بیک وقت معروضی لینس میں داخل ہوتی ہے اور اتیجیت اور فلوروسینس کو الگ کرتے ہوئے، ڈیکروک بیم سیپریٹر پر واپس آتی ہے۔ اس کے بعد بقایا جوش کو بلاک کرنے والے فلٹر کے ذریعے جذب کیا جاتا ہے۔ اگر مختلف ایکسائٹیشن فلٹرز/ڈول کلر بیم سیپریٹرز/بلاکنگ فلٹر کے امتزاج کا استعمال کیا جائے تو وہ مختلف فلوروسینٹ ری ایکشن مصنوعات کی ضروریات کو پورا کر سکتے ہیں۔ اس فلوروسینٹ مائکروسکوپ کا فائدہ یہ ہے کہ بصارت کی روشنی کا میدان یکساں ہے، امیجنگ واضح ہے، اور جتنی بڑی میگنیفیکیشن ہوگی، فلوروسینس اتنا ہی مضبوط ہوگا۔
