Inverted Fluorescence Microscope کا صحیح استعمال
الٹا فلوروسینس مائیکروسکوپ ایک ملٹی فنکشنل خوردبین ہے جو اعلیٰ درجے کی حیاتیاتی سائنس کی تحقیق کے میدان میں استعمال ہوتی ہے۔ اس کی ساخت پیچیدہ اور مہنگی ہے۔ لہذا، میڈیکل گریجویٹ طالب علموں کے لیے الٹی فلوروسینس مائیکروسکوپ کے آپریشن اور استعمال کو درست طریقے سے سمجھنے کے لیے، اساتذہ کو پہلے الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ کے اصل آپریشن کا مظاہرہ کرنا چاہیے۔ اس سے پہلے، الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ کے بنیادی علم کو سیکھنے کے لیے ایک کورس ترتیب دیا گیا تھا، جس میں الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ کی ساخت، اصول، فنکشن اور بنیادی استعمال کے طریقے متعارف کروائے گئے تھے، اور پھر مخصوص آپریشن میں، مختلف نمونوں کے لیے، مختلف افعال کا مظاہرہ کرتے ہوئے، اتلی سے گہرائی تک، آہستہ آہستہ میڈیکل گریجویٹ طلباء کی طرف سے الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ کے استعمال کو معیاری بنانا۔
1. روشن فیلڈ مشاہدے کا درست استعمال۔ الٹی فلوروسینس خوردبین کے افعال میں سے ایک روشن فیلڈ مشاہدہ ہے۔ بنیادی اصول یہ ہے کہ نمونہ کو روشنی سے شعاع کرنے کے بعد، روشن پس منظر میں امیجنگ کو محسوس کرنے کے لیے ہر حصے کی روشنی جذب مختلف ہوتی ہے۔ یہ بنیادی طور پر داغدار یا رنگین خلیوں کے لیے موزوں ہے، نمونوں کا مشاہدہ جیسے ٹشو سیکشن۔
2. فیز کنٹراسٹ مشاہدے کا درست استعمال۔ الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ کا دوسرا کام فیز کنٹراسٹ مشاہدہ ہے۔ اس کا بنیادی اصول نمونے کے مختلف حصوں کے نظری راستے کے فرق کو طول و عرض کے فرق میں تبدیل کرنا ہے۔ مشاہدے کا احساس فیز پلیٹ کے ساتھ فیز کنٹراسٹ آبجیکٹیو لینس اور ایک کنڈینسر لینس کے ساتھ ایک رنگ ڈایافرام کے ذریعے کیا جاتا ہے۔ یہ بنیادی طور پر تجرباتی تدریس کے عمل میں زندہ خلیوں یا غیر داغدار بافتوں کے حصوں کے مشاہدے کے لیے لاگو ہوتا ہے، طبی گریجویٹ طلباء کو مرحلے کے برعکس مشاہدے کے بنیادی آپریشن کے طریقوں کا مشاہدہ کرنے کے لیے صحیح طریقے سے رہنمائی کرنے کے علاوہ، ان کی رہنمائی کرنا زیادہ اہم ہے۔ مرحلے کے برعکس مشاہدے کے لیے استعمال ہونے والے نمونوں کو سمجھیں اور ان پر عبور حاصل کریں۔ ان کے لیے کلچرڈ سیلز کا خوردبینی مشاہدہ مستقبل کی سائنسی تحقیق میں سب سے زیادہ استعمال ہوتا ہے۔ سب سے پہلے، سیل آلات کے انتخاب کے لیے، عام طور پر شیشے اور پلاسٹک کے کلچر ڈشز، کلچر پلیٹس اور کلچر کی بوتلیں استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔ ان میں سے زیادہ تر بے رنگ اور شفاف ہوتے ہیں، اور ان کا براہ راست ایک الٹی فلوروسینٹ مائکروسکوپ پر سیل فلویڈ اور دیگر علاج کے بغیر مشاہدہ کیا جا سکتا ہے۔ دوم، خوردبینی مشاہدے کے دوران آلات کا احاطہ اپنی مرضی سے نہ کھولیں، تاکہ خلیات آلودہ نہ ہوں۔ آخر میں، آپریٹرز کے لیے، انہیں دستانے، ماسک اور سفید کوٹ پہننے کی ضرورت ہے، جو نہ صرف ان کی اپنی صحت کی حفاظت کر سکتے ہیں بلکہ سیل کی آلودگی کو بھی روک سکتے ہیں۔
3. فلوروسینس مشاہدے کا درست استعمال۔ الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ کا تیسرا کام فلوروسینس مشاہدہ ہے۔ بنیادی اصول فلوروسینس پیدا کرنے کے لیے نمونے کو اکسانے کے لیے جوش کی روشنی کا استعمال کرنا ہے، تاکہ نمونے کی شکل اور پوزیشن کے مشاہدے کا احساس ہو سکے۔ یہ بنیادی طور پر فلوروسینٹ لیبل والے نمونوں کے مشاہدے کے لیے موزوں ہے۔ فلوروسینس مشاہدہ ایک الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ کا ایک اہم کام ہے، اور اس کے لوازمات مہنگے اور استعمال میں خاص ہیں۔ میڈیکل گریجویٹ طلباء کے آپریشن اور فلوروسینس مشاہدے کے استعمال کو درست طریقے سے سمجھنے کے لیے، اساتذہ کو انہیں نہ صرف آپریشن کے بنیادی طریقے سکھانے چاہئیں، بلکہ اس سے بھی اہم بات یہ ہے کہ انہیں اس کی خصوصیت میں مہارت حاصل کرنا سکھائیں۔ سب سے پہلے، نمونوں کی تیاری میں، سلائیڈ گلاس اور کور گلاس کی سطح ہموار اور مناسب موٹائی ہونی چاہیے (سلائیڈ گلاس 0.8 ملی میٹر اور 1.2 ملی میٹر کے درمیان ہونا چاہیے، اور کور گلاس تقریباً 0 ہونا چاہیے۔ {5}}.17 ملی میٹر)؛ نمونہ کی موٹائی مناسب ہونی چاہیے اور خلیات کو اوورلیپ کرنے یا نجاست کے ذریعے ماسک کرنے سے گریز کرنا چاہیے؛ بڑھتے ہوئے میڈیم کو گلیسرول اور کاربونیٹ بفر (0.5mol/L pH9۔{10}}.5) کا مساوی حجم کا مرکب استعمال کرنا چاہیے۔ دوم، فلوروسینٹ مشاہدے سے پہلے، کمرے میں برقی روشنی اور الٹی فلورسنٹ مائکروسکوپ کی سفید روشنی کو بند کر دینا چاہیے تاکہ تاریک کمرے میں ماحول کو یقینی بنایا جا سکے۔ آخر میں، فلوروسینس مشاہدے میں، مشاہدے کے وقت کو سختی سے کنٹرول کیا جانا چاہیے، عام طور پر 1-2 گھنٹے/وقت مناسب ہے، ورنہ فلوروسینس کم ہو جائے گا اور غائب ہو جائے گا؛ روشنی کے منبع کو ایڈجسٹ کرتے وقت، شیشے کو الٹرا وائلٹ شعاعوں کے نقصان سے بچنے کے لیے حفاظتی شیشے پہنیں۔
4. تصویر کی گرفت کا درست استعمال۔ سائنسی تحقیق میں، نہ صرف یہ ضروری ہے کہ الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ مختلف مشاہدات کا ادراک کر سکے، بلکہ یہ بھی ضروری ہے کہ الٹی فلوروسینس خوردبین تصویر کی گرفت کا احساس کر سکے۔ الٹا فلوروسینس مائکروسکوپ سسٹم فوٹو الیکٹرک کنورژن کے ذریعے ایک آپٹیکل مائکروسکوپ کو کمپیوٹر کے ساتھ جوڑتا ہے، نہ صرف آئی پیس پر مائکروسکوپک مشاہدے کے لیے، بلکہ کمپیوٹر پر حقیقی وقت میں متحرک تصویری مشاہدے، ترمیم اور بچت کے لیے بھی۔
