(دو فوٹوون ، کنفوکل) فلوروسینس مائکروسکوپ اور عام مائکروسکوپ کے درمیان فرق
دو فوٹون جوش و خروش کا بنیادی اصول یہ ہے کہ اعلی فوٹوون کثافت پر ، فلوروسینٹ انو بیک وقت دو لمبی طول موج کے فوٹوون جذب کرسکتے ہیں اور نام نہاد پرجوش ریاست کی زندگی کی ایک مختصر مدت کے بعد ایک مختصر طول موج کے فوٹوون کا اخراج کرسکتے ہیں۔ اس کا اثر فلوروسینٹ انووں کو اکسانے کے لئے لمبی طول موج کی آدھی طول موج کے ساتھ فوٹوون کا استعمال کرنے کے مترادف ہے۔ دو فوٹوون جوش و خروش کے لئے ایک اعلی فوٹوون کثافت کی ضرورت ہوتی ہے ، اور نقصان دہ خلیوں سے بچنے کے ل two ، دو فوٹون مائکروسکوپی اعلی توانائی کے موڈ سے لاک پلس لیزرز کا استعمال کرتی ہے۔ اس لیزر کے ذریعہ خارج ہونے والے لیزر میں اعلی چوٹی کی توانائی اور کم اوسط توانائی ہے ، جس کی نبض کی چوڑائی صرف 100 فیمٹوسیکنڈ کی ہے اور اس کی فریکوئنسی 80 سے 100 میگاہٹز تک ہے۔ جب نبض لیزر کے فوٹون کو مرکوز کرنے کے لئے ایک اعلی عددی یپرچر مقصد لینس کا استعمال کرتے ہیں تو ، مقصد لینس کے فوکل پوائنٹ پر فوٹوون کثافت سب سے زیادہ ہے ، اور دو فوٹوون جوش و خروش صرف مقصد لینس کے فوکل پوائنٹ پر ہوتا ہے۔ لہذا ، دو فوٹون مائکروسکوپ کو کنفوکل پنہول کی ضرورت نہیں ہے ، جو فلوروسینس کا پتہ لگانے کی کارکردگی کو بہتر بناتا ہے۔
عام فلوروسینس فینومینا میں ، جوش و خروش کی روشنی کی کم فوٹوون کثافت کی وجہ سے ، ایک فلوروسینٹ انو صرف ایک وقت میں ایک فوٹوون جذب کرسکتا ہے اور پھر ریڈی ایٹو ٹرانزیشن کے ذریعے ایک اور فلوروسینٹ فوٹوون خارج کرسکتا ہے ، جسے سنگل فوٹوون فلوروسینس کے نام سے جانا جاتا ہے۔ فلوروسینس اتیجیت کے عمل کے ل liz لیزرز کو روشنی کے ذرائع کے طور پر استعمال کرتے ہوئے ، دو فوٹون یا اس سے بھی ملٹی فوٹن فلوروسینس فینومینا ہوسکتا ہے۔ اس معاملے میں ، استعمال ہونے والے جوش و خروش کے منبع میں اعلی شدت اور فوٹوون کثافت ہوتی ہے جو بیک وقت دو فوٹون جذب کرنے کے لئے فلورسنٹ انووں کی ضرورت کو پورا کرتی ہے۔ جوش و خروش روشنی کے ماخذ کے طور پر عام لیزر کو استعمال کرنے کے عمل میں ، فوٹوون کثافت اب بھی دو فوٹون جذب کے رجحان کو تیار کرنے کے لئے ناکافی ہے۔ عام طور پر ، فیمٹوسیکنڈ پلس لیزر استعمال کیے جاتے ہیں ، جس میں فوری طاقت میگا واٹ کی سطح تک پہنچ جاتی ہے۔ لہذا ، دو فوٹون فلوروسینس کی طول موج جوش و خروش کی روشنی سے کم ہے ، جو آدھے جوش و خروش طول موج کے افتتاح کے ذریعہ تیار کردہ اثر کے برابر ہے۔
کنفوکال فلوروسینس مائکروسکوپی سے متعلق علم
کنفوکل فلوروسینس مائکروسکوپی کا بنیادی اصول یہ ہے کہ نمونہ کو غیر منقولہ کرنے کے لئے ایک نقطہ روشنی کا ذریعہ استعمال کیا جائے ، جس سے فوکل طیارے میں ایک اچھی طرح سے روشنی کی روشنی کی جگہ بن جائے۔ شعاع ریزی کے بعد اس جگہ سے خارج ہونے والا فلوروسینس معروضی عینک کے ذریعہ جمع کیا جاتا ہے اور اصل شعاع ریزی کے راستے پر ڈیکروک آئینے پر مشتمل بیم اسپلٹر پر واپس بھیج دیا جاتا ہے۔ سپیکٹومیٹر فلوروسینس کو براہ راست ڈیٹیکٹر کو بھیجتا ہے۔ روشنی کے منبع اور ڈیٹیکٹر دونوں کے سامنے ایک پنہول ہے ، جسے بالترتیب الیومینیشن پنہول اور پتہ لگانے کا پنہول کہا جاتا ہے۔ دونوں کے ہندسی طول و عرض مستقل ہیں ، تقریبا 100-200 nm ؛ فوکل طیارے میں روشنی کی جگہ کے مقابلے میں ، دونوں کنجوجٹ ہیں ، اس کا مطلب یہ ہے کہ روشنی کا مقام عینک کی ایک سیریز سے گزرتا ہے اور بالآخر ایک ساتھ الیومینیشن پنہول اور پتہ لگانے کا پنہول دونوں پر توجہ مرکوز کرسکتا ہے۔ اس طرح سے ، فوکل طیارے سے روشنی کا پتہ لگانے کے سوراخ کی حدود میں تبدیل ہوسکتا ہے ، جبکہ فوکل طیارے کے اوپر یا نیچے سے بکھرے ہوئے روشنی کا پتہ لگانے کے سوراخ سے باہر مسدود کردیا جاتا ہے اور اس کی امیج نہیں کی جاسکتی ہے۔ نمونہ نقطہ کو ایک لیزر کے ساتھ نقطہ کے مطابق اسکین کرتے ہوئے ، پنہول کا پتہ لگانے کے بعد فوٹووملٹیپلئیر ٹیوب بھی لائٹ اسپاٹ پوائنٹ کی اسی طرح کی کنفوکل امیج کو نقطہ کے لحاظ سے حاصل کرتا ہے ، اسے ڈیجیٹل سگنل میں تبدیل کرتا ہے اور اسے کمپیوٹر میں منتقل کرتا ہے ، اور آخر کار اسے اسکرین پر پورے فوکل ہوائی جہاز کی واضح کنفوکل امیج میں جمع کرتا ہے۔
