دو فوٹون فلوروسینس مائکروسکوپی کیا ہے؟
دو فوٹوون کی حوصلہ افزائی کا بنیادی اصول یہ ہے: اعلی فوٹوون کثافت کی صورت میں، فلوروسینٹ مالیکیول ایک ہی وقت میں دو لمبی طول موج کے فوٹون کو جذب کر سکتے ہیں، اور نام نہاد پرجوش ریاست کی زندگی کے مختصر عرصے کے بعد ایک مختصر طول موج کے فوٹون کا اخراج کر سکتے ہیں۔ . ; اثر ایک ایسے فوٹون کے استعمال جیسا ہے جس کی طول موج ایک فلوروسینٹ مالیکیول کو اکسانے کے لیے نصف لمبی طول موج ہے۔ دو فوٹوون اتیجیت کے لیے اعلی فوٹوون کثافت کی ضرورت ہوتی ہے۔ خلیات کو نقصان نہ پہنچانے کے لیے، دو فوٹون مائکروسکوپی ہائی انرجی موڈ لاکڈ پلسڈ لیزرز کا استعمال کرتی ہے۔ اس لیزر سے خارج ہونے والے لیزر میں اعلی چوٹی کی توانائی اور کم اوسط توانائی ہے، اس کی نبض کی چوڑائی صرف 100 فیمٹو سیکنڈ ہے، اور اس کی فریکوئنسی 80 سے 100 میگا ہرٹز تک پہنچ سکتی ہے۔ جب پلسڈ لیزر کے فوٹون کو فوکس کرنے کے لیے ایک اعلی عددی یپرچر آبجیکٹیو لینس کا استعمال کرتے ہیں، تو آبجیکٹیو لینس کے فوکل پوائنٹ پر فوٹوون کی کثافت سب سے زیادہ ہوتی ہے، اور دو فوٹوون کا جوش صرف مقصدی لینس کے فوکل پوائنٹ پر ہوتا ہے۔ دو فوٹون مائکروسکوپ کو کنفوکل پن ہول کی ضرورت نہیں ہے، جو فلوروسینس کا پتہ لگانے کی کارکردگی کو بہتر بناتا ہے۔
عام فلوروسینس مظاہر میں، جوش کی روشنی کی کم فوٹوون کثافت کی وجہ سے، ایک فلوروسینٹ مالیکیول ایک ہی وقت میں صرف ایک فوٹوون کو جذب کر سکتا ہے، اور پھر ایک ریڈی ایٹیو ٹرانزیشن کے ذریعے فلوروسینٹ فوٹون خارج کر سکتا ہے، جو کہ سنگل فوٹون فلوروسینس ہے۔ روشنی کے منبع کے طور پر لیزر کا استعمال کرتے ہوئے فلوروسینس حوصلہ افزائی کے عمل کے لئے، دو فوٹوون یا یہاں تک کہ ملٹی فوٹون فلوروسینس ہوسکتا ہے۔ اس وقت، استعمال ہونے والے اتیجیت روشنی کے ماخذ کی شدت زیادہ ہے، اور فوٹوون کی کثافت فلوروسینٹ مالیکیولز کی ضروریات کو پورا کرتی ہے جو بیک وقت دو فوٹون جذب کرتے ہیں۔ ایک عام لیزر کو اتیجیت روشنی کے ذریعہ کے طور پر استعمال کرنے کے عمل میں، فوٹوون کی کثافت اب بھی دو فوٹوون جذب کرنے کے رجحان کو پیدا کرنے کے لیے کافی نہیں ہے۔ عام طور پر، فیمٹوسیکنڈ پلسڈ لیزر استعمال کیا جاتا ہے، اور اس کی فوری طاقت میگاواٹ کے آرڈر تک پہنچ سکتی ہے۔ لہذا، دو فوٹون فلوروسینس کی طول موج اتیجیت روشنی کی طول موج سے کم ہے، جو کہ نصف اتیجیت طول موج پر جوش سے پیدا ہونے والے اثر کے برابر ہے۔
