مجھے کنفوکل مائکروسکوپ استعمال کرنے کی ضرورت کیوں ہے؟
1. آپٹیکل مائکروسکوپ کو ہمارے عظیم پیشروؤں کی کوششوں اور بہتری کے ذریعے مکمل کیا گیا ہے۔ درحقیقت، عام خوردبین ہمیں آسانی سے اور تیزی سے خوبصورت خوردبین تصاویر فراہم کر سکتی ہے۔ تاہم، وہ واقعہ جس نے تقریباً کامل خوردبینوں کی دنیا میں انقلاب برپا کر دیا وہ "لیزر سکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپ" کی ایجاد تھی۔ اس نئی قسم کی مائیکروسکوپ ایک نظری نظام کی خصوصیت رکھتی ہے جو تصویر کی معلومات کو صرف اس سطح سے نکالتا ہے جس پر توجہ مرکوز ہوتی ہے، اور تصویر کی یادداشت میں حاصل کردہ معلومات کو بازیافت کرتے ہوئے فوکس کو تبدیل کرکے، تیز تصویر حاصل کرنا ممکن ہے۔ مکمل 3-جہتی معلومات۔ اس طرح، سطح کی شکل کے بارے میں آسانی سے معلومات حاصل کرنا ممکن ہے جس کی تصدیق روایتی خوردبین سے نہیں کی جا سکتی۔ اس کے علاوہ، جب کہ "بڑھتی ہوئی ریزولوشن" اور "فوکس کی گہرائی" روایتی نظری خوردبین کے لیے متضاد حالات ہیں، خاص طور پر اعلی میگنیفیکیشن پر، اس مسئلے کو کنفوکل خوردبین سے حل کیا جاتا ہے۔
2. کنفوکال آپٹیکل سسٹم کے فوائد
لیزر کنفوکل مائکروسکوپ کا اسکیمیٹک خاکہ
کنفوکل آپٹیکل سسٹم نمونے کی ایک پوائنٹ الیومینیشن ہے، جبکہ منعکس روشنی بھی پوائنٹ ریسیپٹر کے ذریعے حاصل کی جاتی ہے۔ جب نمونہ فوکل پوائنٹ پر رکھا جاتا ہے تو، تقریباً تمام منعکس شدہ روشنی فوٹو ریسیپٹر تک پہنچ جاتی ہے، اور جب نمونہ فوکس سے باہر ہوتا ہے، تو منعکس شدہ روشنی فوٹو ریسیپٹر تک نہیں پہنچ سکتی۔ دوسرے الفاظ میں، کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، صرف وہی تصویر جو فوکل پوائنٹ کے ساتھ ملتی ہے آؤٹ پٹ ہوتی ہے، اور دھبوں اور بیکار بکھری ہوئی روشنی کو بلاک کر دیا جاتا ہے۔
3. لیزر کیوں استعمال کریں؟
کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، نمونہ ایک نقطہ پر روشن ہوتا ہے اور منعکس روشنی ایک پوائنٹ سینسر کے ذریعے موصول ہوتی ہے۔ لہذا، ایک نقطہ روشنی کا ذریعہ ضروری ہے. لیزر بہت زیادہ نقطہ روشنی کا ذریعہ ہیں۔ زیادہ تر معاملات میں، کنفوکال خوردبین کے لیے روشنی کا ذریعہ ایک لیزر روشنی کا ذریعہ ہے۔ اس کے علاوہ، لیزرز کی یک رنگی، سمت بندی، اور بہترین بیم کی شکل ان کے وسیع پیمانے پر اپنانے کی اہم وجوہات ہیں۔
4. تیز رفتار اسکیننگ پر مبنی حقیقی وقت کا مشاہدہ ممکن ہے۔
لیزر اسکیننگ کے لیے، ایک صوتی آپٹیکل ڈیفلیکشن یونٹ (Acoustic Optical Deflector, AO prime) افقی سمت میں استعمال کیا جاتا ہے، اور ایک سروو الیکٹرانک کنٹرولڈ بیم اسکیننگ مرر (Servo Galvano-mirror) عمودی سمت میں استعمال ہوتا ہے۔ چونکہ AO Deflector میں کوئی مکینیکل وائبریشن نہیں ہے، اس لیے تیز رفتار اسکیننگ ممکن ہے، اور مانیٹر اسکرین پر ریئل ٹائم مشاہدہ ممکن ہے۔ اس کیمرے کی تیز رفتار ایک بہت اہم چیز ہے جو فوکس اور پوزیشن کی بازیافت کی رفتار کو براہ راست متاثر کرتی ہے۔
5. فوکس پوزیشن اور چمک کے درمیان تعلق
کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، نمونے کو فوکل پوزیشن میں صحیح طریقے سے رکھا جاتا ہے جب چمک بڑی ہو، اس کے آگے اور پیچھے، اس کی چمک تیزی سے کم ہو جائے گی (شکل 4 ٹھوس لائن)۔ فوکل ہوائی جہاز کی یہ حساس انتخاب کنفوکل مائکروسکوپ کی اونچائی کی سمت اور توجہ کی توسیع کی گہرائی کے پیچھے اصول ہے۔ اس کے برعکس، عام آپٹیکل خوردبینیں فوکل پوزیشن سے پہلے اور بعد میں چمک میں کوئی خاص تبدیلی نہیں دکھاتی ہیں (تصویر 4 میں ڈاٹڈ لائن)۔
6. ہائی کنٹراسٹ، ہائی ریزولوشن
ایک روایتی آپٹیکل مائکروسکوپ میں، خوردبین کے فوکس والے حصے سے منعکس ہونے والی روشنی مائکروسکوپ کے فوکل امیجنگ والے حصے کے ساتھ مداخلت کرتی ہے اور اس کے ساتھ اوورلیپ ہوتی ہے، جس کے نتیجے میں تصویر کے برعکس میں کمی واقع ہوتی ہے۔ اس کے برعکس، کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، فوکل پوائنٹ کے باہر اور معروضی لینس کے اندر بکھری ہوئی روشنی کو تقریباً مکمل طور پر ہٹا دیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں بہت زیادہ کنٹراسٹ والی تصاویر سامنے آتی ہیں۔ اس کے علاوہ، خوردبین کی حل کرنے کی طاقت کو بہتر بنایا گیا ہے کیونکہ روشنی دو بار معروضی لینس سے گزرتی ہے، پوائنٹ امیج کو تیز کرتی ہے۔
7. آپٹیکل لوکلائزیشن فنکشن
کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، منعکس روشنی کو فوکل پوائنٹ کے علاوہ کسی اور مقام پر مائیکرو یپرچر کے ذریعے محفوظ کیا جاتا ہے۔ نتیجے کے طور پر، تین جہتی نمونے کا مشاہدہ کرتے وقت، تصویر اس طرح بنتی ہے جیسے نمونے کو فوکل پوائنٹ (تصویر 5) کے ساتھ کاٹا گیا ہو۔ اس اثر کو آپٹیکل لوکلائزیشن کہا جاتا ہے اور یہ کنفوکل آپٹیکل سسٹم کی خصوصیات میں سے ایک ہے۔
