ہمیں کنفوکل مائکروسکوپی کی ضرورت کیوں ہے؟
1. ہمارے عظیم پیشروؤں کی کوششوں اور بہتری کے بعد، آپٹیکل مائکروسکوپ ایک بہترین سطح پر پہنچ گئی ہے۔ درحقیقت، باقاعدہ خوردبین ہمیں آسانی سے اور جلدی سے خوبصورت خوردبین تصاویر فراہم کر سکتی ہیں۔ تاہم، ایک ایسا واقعہ پیش آیا جس نے خوردبین کی اس تقریباً کامل دنیا میں انقلابی جدت لائی، جو کہ ’’لیزر اسکیننگ کنفوکل مائیکروسکوپ‘‘ کی ایجاد تھی۔ اس نئی قسم کی خوردبین کی خصوصیت یہ ہے کہ یہ ایک نظری نظام اپناتا ہے جو صرف اس سطح پر تصویری معلومات نکالتا ہے جہاں توجہ مرکوز ہوتی ہے۔ فوکس کو تبدیل کرکے اور حاصل کردہ معلومات کو امیج میموری میں بحال کرکے، یہ مکمل 3D انفارمیشن انٹیلی جنس کے ساتھ واضح تصاویر حاصل کرسکتا ہے۔ اس طریقے کے ذریعے سطح کی شکل کے بارے میں معلومات جن کی تصدیق روایتی خوردبین سے نہیں کی جا سکتی ہے آسانی سے حاصل کی جا سکتی ہے۔ اس کے علاوہ، عام نظری خوردبینوں کے لیے، "بڑھتی ہوئی ریزولوشن" اور "فوکل کی گہرائی کو گہرا کرنا" متضاد حالات ہیں، خاص طور پر ہائی میگنیفیکیشن پر۔ تاہم، confocal خوردبین میں، یہ مسئلہ آسانی سے حل کیا جاتا ہے.
2. کنفوکل آپٹیکل سسٹمز کے فوائد
کنفوکل آپٹیکل سسٹم نمونے کے پوائنٹ الیومینیشن کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، اور منعکس روشنی بھی پوائنٹ سینسر کے ذریعے موصول ہوتی ہے۔ جب نمونہ فوکل پوزیشن میں رکھا جاتا ہے، تو تقریباً تمام منعکس شدہ روشنی سینسر تک پہنچ سکتی ہے۔ جب نمونہ فوکل پوائنٹ سے ہٹ جاتا ہے تو منعکس ہونے والی روشنی سینسر تک نہیں پہنچ سکتی۔ کہنے کا مطلب یہ ہے کہ کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، صرف وہی تصویر جو فوکس کے ساتھ ملتی ہے آؤٹ پٹ ہوگی، اور جگہ اور بیکار بکھری ہوئی روشنی کو ڈھال دیا جائے گا۔
لیزر کیوں استعمال کریں؟
کنفوکل آپٹیکل سسٹمز میں، پوائنٹ الیومینیشن نمونے پر لگائی جاتی ہے، اور منعکس روشنی بھی پوائنٹ سینسر کے ذریعے موصول ہوتی ہے۔ لہذا، نقطہ روشنی کے ذرائع ضروری ہو گئے ہیں. لیزر ایک بہت ہی نقطہ روشنی کا ذریعہ ہے۔ زیادہ تر معاملات میں، کنفوکال مائکروسکوپی کا روشنی کا ذریعہ لیزر ہے۔ اس کے علاوہ، لیزرز کی یک رنگی، سمت بندی، اور بہترین بیم کی شکل بھی ان کے وسیع پیمانے پر اپنانے کی اہم وجوہات ہیں۔
4. تیز رفتار سکیننگ پر مبنی حقیقی وقت کا مشاہدہ ممکن ہو جاتا ہے۔
لیزر اسکیننگ افقی سمت میں ایکوسٹک آپٹیکل ریفلیکٹر (AO) اور عمودی سمت میں سروو گیلوانو آئینے کا استعمال کرتی ہے۔ آڈیو آپٹیکل بائیس یونٹ میں مکینیکل وائبریشنز کی عدم موجودگی کی وجہ سے، مانیٹرنگ اسکرین پر تیز رفتار اسکیننگ اور ریئل ٹائم میں مشاہدہ کرنا ممکن ہے۔ اس قسم کے کیمرے کی تیز رفتار ایک بہت اہم عنصر ہے جو توجہ مرکوز کرنے اور پوزیشن حاصل کرنے کی رفتار کو براہ راست متاثر کرتی ہے۔
5. فوکل پوزیشن اور چمک کے درمیان تعلق
کنفوکل آپٹیکل سسٹم میں، جب نمونے کو صحیح طریقے سے فوکل پوزیشن میں رکھا جاتا ہے، تو چمک زیادہ ہوتی ہے، اور چمک اس سے پہلے اور بعد میں تیزی سے کم ہوجاتی ہے (شکل 4 میں ٹھوس لکیر)۔ اس فوکل ہوائی جہاز کی حساس سلیکٹیوٹی خاص طور پر اونچائی کی سمت کے تعین اور کنفوکل مائکروسکوپی میں فوکل گہرائی کی توسیع کے پیچھے اصول ہے۔ اس کے مقابلے میں، عام آپٹیکل خوردبینیں فوکل پوزیشن سے پہلے اور بعد میں چمک کی نمایاں تبدیلیاں نہیں دکھاتی ہیں (شکل 4 میں نقطے والی لکیر)۔
6. ہائی کنٹراسٹ اور ریزولوشن
ایک عام آپٹیکل مائیکروسکوپ، فوکل پوائنٹ سے منحرف روشنی کی وجہ سے مداخلت کی وجہ سے، فوکل امیجنگ حصے کے ساتھ اوورلیپ ہو جاتی ہے، جس کے نتیجے میں تصویر کے تضاد میں کمی واقع ہوتی ہے۔ اس کے برعکس، کنفوکل آپٹیکل سسٹمز میں، فوکس سے باہر بکھری ہوئی روشنی اور معروضی لینس کے اندر بکھری ہوئی روشنی کو تقریباً مکمل طور پر ہٹا دیا جاتا ہے، اس طرح بہت زیادہ کنٹراسٹ والی تصاویر حاصل ہوتی ہیں۔ اس کے علاوہ، اس حقیقت کی وجہ سے کہ روشنی دو بار آبجیکٹیو لینس سے گزرتی ہے، پوائنٹ امیج پہلے تیز ہو جاتا ہے، جس سے خوردبین کی ریزولوشن بھی بہتر ہوتی ہے۔
